自噬在三氧化二砷诱导白血病细胞系HL60细胞死亡中的作用

摘要

目的：研究自噬在三氧化二砷(As203)诱导的HL60细胞死亡中的作用，初步探讨自噬的作用机制。 方法：用不同浓度的As203处理人原髓细胞白血病细胞株HL60细胞，采用MTT法测定As203对HL60细胞增殖的抑制作用：应用MDC荧光染色和透射电镜观察给药后自噬和凋亡的发生以及细胞超微结构的变化；检测LDH漏出率以观察用自噬特异性抑制剂3．MA阻断自噬后As203抑瘤作用的变化；免疫组化、流式细胞仪和Westemb1ot观察自噬与凋亡在As203诱导的HL60细胞死亡中的分子机制。结果：As203对HL60细胞生长有显著的抑制作用，且此作用呈明显的时间、剂量依赖性：MDC荧光染色和透射电镜结果均显示As203给药后可诱导HL60细胞发生自噬：LDH漏出率实验结果表明，在As203给药前阻断自噬，As203对HL60细胞的细胞毒性作用增强，而在其给药后阻断自噬则As203对HL60细胞的细胞毒性作用有所减弱；As203诱导HL60细胞发生自噬时，自噬特异性蛋白LC3被激活；As203诱导的HL60细胞死亡与溶酶体酶cathepsinB、L及蛋白Bid的活化，细胞线粒体膜电位的下降和细胞色素C从线粒体到胞浆的释放以及caspase-3的激活有关；在As203给药前用3．MA预先阻断自噬，与As203单独给药组相比，可见cathepinB、L和Bid活化片段的表达增加，线粒体膜电位下降幅度变大，cyto-c释放增多，caspase-3也被大量激活；而在As203给药后加入3一MA阻断自噬，与As203单独给药组相比，cathepsinB、D和Bid活化片段的表达有所减少，线粒体膜电位的下降幅度减少，细胞色素C的释放和caspase-3的激活也在一定程度上被抑制。 结论：As203能明显抑制HL60细胞的生长，并诱导其发生自噬和凋亡。在As203给药前期，自噬对细胞有保护作用，可作为一种防御机制抵御环境变化对细胞造成的损伤，隔离某些凋亡因子，延迟凋亡的发生：而在As203给药后期，自噬则作为一种细胞的死亡程序，通过激活溶酶体酶、Bid、细胞色素C和caspase-3等一系列凋亡相关因子，促进凋亡的发生，最终与凋亡一起促进细胞死亡。

目录

文摘

英文文摘

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前 言

第一部分As2O3诱导HL60细胞自噬活化

第二部分自噬在As2O3诱导的HL60细胞死亡中的作用机制

讨论

结 论

参考文献

攻读学位期间发表的论文

附录一综述 Molecular mechanism and regulation of autophagy

附录二英文缩略词表

致谢