胎膜早破伴及不伴绒毛膜羊膜炎症孕妇胎膜中MMP-9、MMP-8及TIMP-2差异表达研究

摘要

目的 通过研究胎膜中基质金属蛋白酶8和9(MMP-8，MMP-9)以及TIMP一2在胎膜早破伴绒毛膜羊膜炎症及不伴绒毛膜羊膜炎症的表达差异，并从临床上探讨MMP-8，MMP-9以及TIMP-2的表达变化与孕妇、新生儿疾病的相关性研究，探讨MMP-9，MMP-8及TIMP-2与胎膜早破及绒毛膜羊膜炎的关系。 方法 1．病例选择和实验分组：确立实验分组，分为对照组：无指征剖宫产组(无宫缩)16例，胎膜早破组(23例)，以病理结果为准，又分为胎膜早破不伴绒毛膜羊膜炎症组10例，胎膜早破伴绒毛膜羊膜炎症组13例，后者再分为轻度炎症组6例，中度炎症组3例，和重度炎症组4例。 2．进行预试验，摸索一抗最佳稀释浓度，选择修复种类，修复时间，实验温度，试剂用量，各试剂加入时间，读片时间等其它试验条件。 3．根据阳性和阴性对照及参考文献确定结果叛定的标准，如确定阳性细胞标准，确定阳性，阴性，强阳性，弱阳性评分标准。 4．按以上分组收集病人外周血，阴道分泌物及胎膜标本，进行白细胞计数，细菌性阴道炎检测，分泌物培养，胎膜标本制作病理石蜡标本，每份标本切三张片，同时严格按照试剂盒的操作步骤进行MMP一8，MMP-9及TIMP-2的免疫组织化学染色，并同时送检到病理科检测是否有绒毛膜羊膜炎。 5．免疫组化实验根据染色结果确定各项指标在胎膜中着色部位，并按标准进行计分，比较各指标及MMP-8／TIMP-2，MlVlP-9／TIMP-2比值在不同组及不同母婴临床表现时的表达差异。 6．免疫组化阴性对照和阳性对照，每次实验均进行阴性对照和阳性对照，阴性对照为不加一抗的片子，阳性对照为试剂公司提供的阳性空白片及阳性标准片。7．免疫组化结果判定标准：MMP-8、MMP-9和TIMP-2的阳性细胞表现为细胞浆内出现棕黄色颗粒，在细胞核和细胞膜上未见明显染色，观察所选择的高倍镜视野中的所有细胞，记录胎膜细胞呈阳性染色细胞百分数(％)并计分。阴性：小于5％或胎膜细胞显色与背景一致，计O分。弱阳性：5％-10％，1分。阳性：11％-50％，2分；强阳性：大于50％，3分。细胞着色强度以多数阳性细胞呈现的染色(棕黄色)计分，强着色：着色和已知阳性片同样强，3分。浅着色：着色浅，但与阴性对照片有明显区别，1分。染色强度在浅着色和强着色之间为中等着色，2分。将阳性百分数记分和细胞染色强度计分相加为MMP-9，MMP-8，TIMP一2的免疫组化积分。 结果 1．免疫组化实验条件优化。 1．1修复条件的选择。因为MMP-8，TIMP-2需要修复，经过预试验，比较了高压修复、微波修复，及PH不同的柠檬酸缓冲液，最后选择高压修复，修复液选择PH6．0的柠檬酸缓冲液。 1．2一抗浓度的选择，MMP-8使用的是浓缩液，因而我们比较了l：50，1：100，l：150不同梯度稀释后加入一抗的染色结果，最后选择1：100稀释。 1．3加一抗后孵育时间和温度的选择。经过比较37度孵育、室温孵育，孵育1小时，孵育2小时及孵育过夜的结果，选择室温孵育1小时。 2．MMP一9，MMP-8，TIMP-2的表达差异。 2．1MMP一9，MMP-8，TIMP-2主要在胎膜中的羊膜上皮，绒毛膜上皮及间质细胞中表达，其中阳性信号位于胞浆内，呈棕黄色。 2．2对照组(无临产症状的无指征剖宫产)中，MMP-9表达均值为2．3l±0．70，MMP-8为0．44±0．51，TIMP-2为4．87±1．08：胎膜早破组中，MMP-9表达均值为4．56±1．26，MMP-8为2．53±L91，TIMP-2为3．31±0．93：其中胎膜早破不合并绒毛膜羊膜炎组：MMP一9为4．37±1．20，MMP-8为0．81±O．40，TIMP一2为3．56±1.00；胎膜早破伴绒毛膜羊膜炎组MMP一9为4．75±1．34，MMP-84．25±1．06，TIMP-2为3．06±0．77。经t、检验，MMP-9，MMP-8和TIMP一2在对照组和胎膜早破组有显著性差异。MMP-8只在胎膜早破伴绒毛膜羊膜炎的胎膜组织增高，在胎膜早破不伴绒毛膜羊膜炎的胎膜组织中表达与对照无显著性差异。 2．3在胎膜早破伴绒毛膜羊膜炎组，MMP-8在轻度，中度，重度的绒毛膜羊膜炎各组均值分别为：4．00±1．10；4．33±0．57；4．75±1．5。 2．4在孕妇外周血白细胞计数偏高时，MMP一8明显偏高。 2．5在胎膜MMP一8值高时，孕妇伴有生殖道炎症及新生儿感染综合征的较多。 结论 1．胎膜早破的发生与基质金属蛋白酶8，基质金属蛋白酶9及TIMP-2的失衡有一定关系。 2．MMP-9在胎膜早破伴炎症和不伴炎症时表达并无显著性差异，提示MMP-9可能主要由胎膜细胞分泌，与炎症无显著相关性。 3．MMP-8的表达增加在胎膜早破伴绒毛膜羊膜炎的病人更为显著，提示MMP一8与羊膜腔内炎症有关。 4．MMP一8与孕妇感染相关，并且与新生儿感染综合征相关。

目录

前言

材料与方法

实验结果

分析与讨论

小结

参考文献：

附录

致谢

综述 （一）基质金属蛋白酶及其组织抑制剂与胎膜早破

综述 （二）MMP-8早期诊断羊膜腔内感染的价值

综述部分参考文献

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