苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白（Vip3）突变体的杀虫活性及其对胰蛋白酶的敏感性

摘要

本文对苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白（Vip3）突变体的杀虫活性及其对胰蛋白酶的敏感性进行了研究。结果显示：(1)缺失C-末端三个氨基酸SIK或在C-末端增加8个氨基酸，都会改变Vip3蛋白结构，使其对胰蛋白酶敏感，丧失杀虫活性；(2)利用简并引物定点诱变了C-末端两个氨基酸，构建了一个包括15个突变体基因在内的突变体池，其中一个突变体Vip3mll末端两个氨基酸由IK替换为LR，对甜菜夜蛾和棉铃虫的杀虫活性得到显著提高，而其它的突变体蛋白活性极低，对胰蛋白酶敏感；(3)有活性的Vip3蛋白经trypsin消化后会形成一个稳定的62kDa抗性核心多肽，而其它的突变体蛋白活性极低，对trypsin非常敏感，抗trypsin的62kDa多肽可以作为有生物活性的Vip3蛋白的标记；(4)原核表达的62kDa多肽片段，没有杀虫活性，且对胰蛋白酶敏感，N-末端的198个氨基酸可以保证Vip3蛋白正确折叠，被trypsin所正确识别和切割，启动活性产生一个62kDa抗性核心多肽。

目录

致谢

摘要

前言

第Ⅰ部分文献综述

第一章苏云金芽孢杆菌及其杀虫毒素研究历史

第二章苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的研究

1.苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的类型及杀虫活性

2.苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的结构及作用机理

第三章苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白的研究

1.苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白的类型及其杀虫活性

2.苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白的作用机理

3.展望

第Ⅱ部分研究内容

第四章苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白Vip3及其突变体基因的克隆与表达

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第五章Vip3及其突变体蛋白的杀虫活性测定及其对胰蛋白酶的敏感性分析

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第Ⅲ部分总结

第六章结论与讨论

1.本研究工作的主要结论

2.讨论

3.本研究的主要创新点及今后研究方向

参考文献