菜蛾盘绒茧蜂Cotesia vestalis毒液和萼液对寄主小菜蛾Plutella xylostella幼虫的免疫调控研究

摘要

本文对菜蛾盘绒茧蜂Cotesia vestalis毒液和萼液对寄主小菜蛾Plutellaxylostella幼虫的免疫调控进行了研究，结果总结如下： 一、体外注射菜蛾盘绒茧蜂毒液和萼液有效浓度的确定借助显微注射实验技术手段，设置0.01、0.03和0.05VRE(FE)/μl的梯度浓度，对四龄初的小菜蛾幼虫进行体外注射，研究菜蛾盘绒茧蜂毒液和萼液对小菜蛾血细胞数量是否有影响，由此确定显微注射的有效浓度.研究表明：(1)Q注射0.01VRE/μl和0.03VRE/μl的寄生蜂毒液后寄主血细胞数量与对照(注射PBS，下同)相比差异不显著；而当注射浓度达到0.05VRE/μl时，寄主血细胞数量与对照相比在注射毒液后的1～4h内显著降低，此后逐步恢复，寄主血细胞数量与对照相比无明显差异，说明0.05VRE/μl的寄生蜂毒液可以在注射后的早期(1～4h)导致小菜蛾血细胞数量降低；(2)注射0.01FE/μl和0.03FE/μl萼液和混合物(毒液+萼液)1h时小菜蛾血细胞数量与单独注射寄生蜂毒液和对照差异不显著，其它各个检测时间点与单独注射毒液和对照相比均降低；(3)注射0.05FE/μl浓度的寄生蜂萼液以及混合物(毒液+萼液)后，小菜蛾血细胞数量与单独注射寄生蜂毒液和对照在各个检测时间点差异显著。此外还发现浓度越高血细胞数量降低越明显，毒液的存在提高了萼液对寄主血细胞数量的影响强度。以上结果表明：0.05VRE(FE)/μl可以作为显微注射的有效浓度。 二、毒液和萼液对小菜蛾离体血细胞包囊作用的影响体外培养实验结果表明：(1)当体系中菜蛾盘绒茧蜂毒液终浓度为0.05VRE/μl时即可在培养的早期(1h内)有效的抑制寄主小菜蛾血细胞对异物(DEAE-Sephadex A-50微珠)的包囊作用；(2)当体系中萼液和混合物(毒液＋萼液)的浓度达到0.05FE/μl时既可完全抑制寄主血细胞对微珠的包囊作用；(3)各种条件(对照、经过毒液、萼液和混合物处理的血细胞)下的小菜蛾血细胞对菜蛾盘绒茧蜂的卵均不能产生包囊作用。 三、注射毒液和萼液对小菜蛾血细胞延展作用的影响菜蛾盘绒茧蜂毒液对寄主血细胞延展的抑制作用主要出现在注射后早期(4小时内)，随着时间的延长，寄主血细胞的延展能力逐渐恢复。但是寄生蜂萼液以及混合物(毒液＋萼液)对寄主血细胞延展的抑制作用却可以维持较长的一段时间(48小时内)，特别混合物的抑制作用更强，而这一现象说明在体外注射条件下寄生蜂毒液对萼液有一定增效作用。　　四、注射毒液和萼液对小菜蛾酚氧化酶活性和血淋巴黑化作用的影响在注射后4h内，菜蛾盘绒茧蜂毒液能抑制小菜蛾血淋巴的黑化过程，此后菜蛾盘绒茧蜂毒液对小菜蛾血淋巴黑化过程无明显的抑制作用。在注射后48h小时内，寄生蜂萼液和混合物(毒液＋萼液)都能有效抑制血淋巴黑化，其中混合物的抑制能力最强。在注射寄生蜂萼液及混合物(毒液＋萼液)的24h内，小菜蛾幼虫血细胞裂解液和血细胞碎片中酚氧化酶活性分别为0.089U和0.046U，与对照相比显著降低，而注射毒液的小菜蛾酚氧化酶活性与对照相比无显著差异。 　　五、注射毒液和萼液对小菜蛾保护酶和血淋巴中过氧化物浓度的影响注射毒液、萼液及混合物(毒液＋萼液)后，小菜蛾幼虫体内过氧化物浓度与对照相比均显著升高，且随着注射后时间的延长，各个处理幼虫体内的过氧化物浓度逐渐升高，特别在注射后48h，注射混合物的小菜蛾幼虫体内过氧化物浓度是其它时间点的1.2-3.0倍。小菜蛾过氧化物酶(POD)活力与对照相比无明显变化，而SOD活力与对照相比均显著升高，除在注射后24h时注射混合物的小菜蛾幼虫SOD活力与注射毒液和萼液的SOD活力差异显著，其它注射后各个测试点注射毒液、萼液及混合物的小菜蛾幼虫SOD活力差异不显著；注射毒液和萼液对小菜蛾过氧化氢酶(CAT)活力影响不明显，而注射混合物可以使小菜蛾CAT活力显著升高。 六、注射毒液和萼液对小菜蛾多功能氧化酶和乙酰胆碱酯酶的影响注射毒液、萼液和混合物(毒液＋萼液)后，小菜蛾多功能氧化酶活性与对照相比差异不显著；从1h到24h小菜蛾幼虫体内的乙酰胆碱酯酶活性对照相比差异不显著，而在36h和48h时各个处理的酶活性显著高于对照，注射混合物的酶活性与注射毒液和萼液的酶活性差异显著，但后两者酶活性差异不显著。

目录

文摘

英文文摘

前言

声明

致谢

第一章 文章综述

1 昆虫的免疫系统概况

1.1 昆虫免疫系统的特征及功能

1.2 昆虫的细胞免疫

1.3 昆虫的体液免疫

2 寄生蜂毒液对寄主的免疫调控

2.1 对寄主体液免疫的影响

2.2 对寄主细胞免疫的影响

3 多分DNA病毒(Polydanvirus，PDV)对寄主的免疫调控

3.1 对寄主细胞免疫的影响

3.2 对寄主体液免疫的影响

4 畸形细胞对寄主的免疫调控

4.1 对寄主细胞免疫的抑制

4.2 对寄主体液免疫的抑制

5 类病毒颗粒(virus-like particle，VLP)对寄主的免疫调控

6 卵巢蛋白对寄主的免疫调控

7 几种寄生因子的协同作用

第二章 基本材料与方法

1 养虫设备

1.1 全自动人工气候室

1.2 智能人工气候箱

1.3 养虫笼

1.4 保蜂盒

1.5 吸虫管

1.6 养虫盒

2 供试材料

2.1 供试蔬菜

2.2 供试昆虫的人工饲养

3 实验仪器及软件系统

3.1 实验仪器

3.2 软件系统

4 实验方法

4.1 菜蛾盘绒茧蜂毒液器官的解剖

4.2 小菜蛾血淋巴的提取

4.3 菜蛾盘绒茧蜂毒液、萼液以及混合物的显微注射

5 常用实验试剂及配制

第三章 小菜蛾幼虫显微注射菜蛾盘绒茧蜂毒液和萼液有效浓度的确定

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

1.2 毒液和萼液的提取

1.3 菜蛾盘绒茧蜂毒液、萼液以及其混合物的显微注射

1.4 毒液、萼液以及其混合物对小菜蛾幼虫血细胞数量的影响

2 结果与分析

2.1 注射不同龄期小菜蛾幼虫的存活率

2.1 注射毒液和萼液后小菜蛾幼虫发育的异常变化

2.2 注射毒液和萼液对小菜蛾幼虫血细胞数量的影响

3 讨论

第四章 菜蛾盘绒茧蜂毒液和萼液对注射后小菜蛾血细胞延展作用和离体血细胞包囊的影响

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

1.2 毒液和萼液对小菜蛾幼虫活体内血细胞延展的影响

1.3 毒液和萼液对小菜蛾幼虫离体血细胞包囊作用的影响

2 结果与分析

2.1 体外注射毒液、萼液以及其混合物对小菜蛾活体血细胞延展作用的影响

2.2 体外培养条件下毒液和萼液对小菜蛾血细胞包囊的影响

3 讨论

第五章 注射菜蛾盘绒茧蜂毒液和萼液对小菜蛾酚氧化酶活性和血淋巴黑化过程的影响

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

1.2 血淋巴黑化现象的观察

1.3 酚氧化酶的活性测定

2 结果与分析

2.1 毒液和萼液对小菜蛾血淋巴黑化作用的影响

2.2 毒液和萼液对小菜蛾血细胞裂解液及血细胞碎片酚氧化酶活性的影响

3 讨论

第六章 注射菜蛾盘绒茧蜂毒液和萼液对小菜蛾保护酶系统和血淋巴过氧化物浓度的影响

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

1.2 保护酶系统活力测定

1.3 血淋巴过氧化物浓度变化

2 结果与分析

3 讨论

第七章 注射菜蛾盘绒茧蜂菜蛾盘绒茧蜂毒液和萼液对小菜蛾多功能氧化酶和乙酰胆碱酯酶的影响

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

1.2 多功能氧化酶(MFOs)酶活性测定

1.3 乙酰胆碱酯酶(AchE)酶活性测定

2 结果与分析

3 讨论

第八章 总论

参考文献

附录：硕士期间发表的文章