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论文说明
致谢
摘要
前言
第一章 文献综述
1.1 寄生蜂毒液蛋白组分的研究进展
1.1.1 毒液生化性质
1.1.2 寄生蜂毒液组分类型
1.2 寄生蜂毒液蛋白生理功能的研究进展
1.2.1 抑制寄主免疫
1.2.2 调控寄主的生长发育
1.2.3 麻痹及阻断寄主神经的作用
第二章 结合转录组和蛋白质组方法解析蝶蛹金小蜂毒液蛋白组分
2.1 材料与方法
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 毒腺的解剖
2.1.3 RNA提取
2.1.4 RNA-Seq测序文库制备
2.1.5 RNA-Seq文库测序
2.1.6 转录组的De novo组装
2.1.7 转录组基因注释
2.1.8 转录组数据差异分析
2.1.9 毒液蛋白的制备
2.1.10 毒液蛋白shotgun分析
2.2 结果与分析
2.2.1 毒腺转录组分析
2.2.2 毒液蛋白质组分析
2.2.3 基于转录组及蛋白质组信息的毒液组分综合分析
2.3 讨论
第三章 蝶蛹金小蜂毒液钙网蛋白的功能及其与寄主菜粉蝶钙网蛋白关系的分析
3.1 材料与方法
3.1.1 供试昆虫
3.1.2 总RNA提取
3.1.3 cDNA第一链的合成
3.1.4 原核表达及纯化
3.1.5 SDS-PAGE电泳
3.1.6 多克隆抗体制备
3.1.7 Western blotting
3.1.8 定量PCR
3.1.9 组织表达分布
3.1.10 时间表达分布
3.1.11 融合蛋白PpCRT与寄生蜂卵结合
3.1.12 细胞免疫组织化学
3.1.13 体外延展
3.1.14 体外包囊
3.1.15 注射及基因表达检测
3.1.16 免疫刺激对菜粉蝶钙网蛋白表达的影响
3.1.17 菜粉蝶血细胞体外包囊反应
3.1.18 RNA干扰
3.1.19 蝶蛹金小蜂寄生对菜粉蝶钙网蛋白表达的影响
3.2 结果与分析
3.2.1 PpCRT的Coiled-coil结构域分析
3.2.2 野生型及缺失Coiled-coil结构域的PpCRT原核表达及纯化
3.2.3 组织分布
3.2.4 毒腺及毒液中表达时相
3.2.5 PpCRT结合到卵表面
3.2.6 PpCRT进入菜粉蝶血细胞
3.2.7 PpCRT抑制寄主血细胞延展
3.2.8 PpCRT抑制寄主血细胞包囊
3.2.9 PpCRT对PrCRT等基因的影响
3.2.10 免疫刺激后PrCRT表达情况
3.2.11 PrCRT体外促进包囊反应
3.2.12 PrCRT RNA干扰后包囊能力降低
3.2.13 蝶蛹金小蜂寄生抑制菜粉蝶血细胞钙网蛋白的表达
3.3 讨论
第四章 蝶蛹金小蜂毒液Pacifastin丝氨酸蛋白酶抑制剂的分离纯化及功能研究
4.1 材料与方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 毒液蛋白的制备
4.1.3 RP-HPLC分离多肽
4.1.4 质谱鉴定
4.1.5 N端测序
4.1.6 总RNA提取
4.1.7 cDNA第一链的合成
4.1.8 基因克隆
4.1.9 原核表达载体构建及表达
4.1.10 多肽化学合成
4.1.11 多克隆抗体制备
4.1.12 组织表达分布
4.1.13 时期表达分布
4.1.14 对昆虫血淋巴PO活性及PPO激活的影响
4.1.15 对丝氨酸蛋白酶活性的影响
4.1.16 数据分析
4.2 结果与分析
4.2.1 毒液蛋白的RP-HPLC分离
4.2.2 分子量测定
4.2.3 N端测序
4.2.4 PpPI基因克隆
4.2.5 PpPI原核表达与纯化
4.2.6 PpPI组织表达分布
4.2.7 PpPI毒腺及毒液表达时相
4.2.8 PpPI化学合成
4.2.9 PpPI对昆虫PO活性及PPO激活的影响
4.2.10 PpPI对丝氨酸蛋白酶活性的影响
4.3 讨论
第五章 蝶蛹金小蜂毒液Kazal类丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能研究
5.1 材料与方法
5.1.1 供试昆虫
5.1.2 总RNA提取
5.1.3 PCR和RACE
5.1.4 原核表达与纯化
5.1.5 多肽化学合成
5.1.6 多克隆抗体制备
5.1.7 组织表达分布
5.1.8 时期表达分布
5.1.9 对寄主血淋巴PO活性及PPO激活的影响
5.1.10 数据分析
5.2 结果与分析
5.2.1 基因克隆及序列分析
5.2.2 PpKazal基因的表达与纯化
5.2.3 组织表达分布
5.2.4 毒腺及毒液表达时相
5.2.5 PpKazal对寄主血淋巴PO活性及PPO激活的影响
5.3 讨论
第六章 蝶蛹金小蜂毒液普通气味结合蛋白特性分析
6.1 材料与方法
6.1.1 供试昆虫
6.1.2 RNA提取
6.1.3 基因克隆
6.1.4 原核表达
6.1.5 抗体制备
6.1.6 组织表达分布
6.1.7 时间表达分布
6.1.8 交配对GOBP表达的影响
6.1.9 营养条件对GOBP表达的影响
6.1.10 寄生对GOBP表达的影响
6.1.11 GOBP在毒腺中定位
6.2 结果与分析
6.2.1 GOBP基因的克隆
6.2.2 GOBP原核表达
6.2.3 GOBP组织分布
6.2.4 毒腺及毒液表达时相
6.2.5 交配对毒腺中GOBP表达的影响
6.2.6 饲喂对毒腺中GOBP表达的影响
6.2.7 寄生对毒腺中GOBP表达的影响
6.2.8 GOBP定位于毒腺中
6.3 讨论
第七章 总讨论
7.1 寄生蜂毒液蛋白组分与功能
7.2 本研究创新之处
7.3 研究中存在的问题
7.4 今后的研究方向
参考文献
附录:攻读博士学位期间发表学术论文