第一部分：半胱氨酰白三烯受体拮抗剂孟鲁司特和HAMI3379在大鼠皮层神经元缺血性损伤中的抗氧化作用；第二部分：原代小胶质细胞半胱氨酰白三烯受体表达的初步研究

摘要

第一部分半胱氨酰白三烯受体拮抗剂孟鲁司特和HAMI3379在体外培养大鼠皮层神经元缺血性损伤中的抗氧化作用
　　目的:在大鼠皮层神经元缺血性损伤模型中，探讨两种半胱氨酰白三烯受体（CysLT1R和CysLT2R）拮抗剂的抗氧化作用。
　　方法:以CysLT1R拮抗剂孟鲁司特和CysLT2R拮抗剂HAMI3379预处理，对体外培养大鼠皮层神经元进行缺糖缺氧/恢复(OGD/R)或H2O2处理，观察神经元活化氧(ROS)产生、线粒体膜电位以及神经元存活率变化，以及两种药物在这些过程中的作用。同时，以RNA干扰抑制CysLT1R和CysLT2R表达，观察以上变化。
　　结果:OGD处理1h后，神经元ROS产生增加，在恢复0.5 h时达高峰;0.01～1μM孟鲁司特和HAMI3379能轻度但显著地抑制OGD/R诱导的ROS产生(P＜0.05)。OGD/R诱导神经元线粒体膜电位下降，0.01～1μM孟鲁司特有轻度抑制作用(P＜0.05)，而HAMI3379无明显作用。外源性H2O2浓度和时间依赖性损伤神经元，孟鲁司特和HAMI3379在0.1～1μM浓度范围内，能轻度但显著地减轻H2O2诱导的损伤(P＜0.05)。CysLT1R siRNA和CysLT2R shRNA对以上反应均无显著影响。
　　结论:孟鲁司特和HAMI3379在神经元缺血性损伤中，均有轻度抗氧化作用，且可能是不依赖受体的作用。
　　第二部分原代小胶质细胞半胱氨酰白三烯受体表达的初步研究
　　目的:初步研究大鼠原代小胶质细胞半胱氨酰白三烯受体表达情况。
　　方法:取出生24h的SD新生鼠，从皮层组织分离、纯化原代小胶质细胞。通过免疫荧光染色方法，观察原代小胶质细胞半胱氨酰白三烯受体CysLT1、CysLT2受体以及GPR17的表达情况，确定是否存在共定位;并且，使用激动剂LPS、NMLTC4诱导，观察受体的表达变化。
　　结果:分离、纯化并获得原代小胶质细胞，免疫荧光染色结果显示，CysLT1、CysLT2受体和GPR17都有表达，它们之间存在明显的共表达（即CysLT1R/CysLT2R、CysLT1R/GPR17和CysLT2R/GPR17）。LPS能刺激CysLT2受体发生内移，并有一定的聚集;而CysLT2受体激动剂NMLTC4诱导的CysLT2受体也诱导内移和聚集，但比LPS弱。
　　结论:原代小胶质细胞表达半胱氨酰白三烯受体CysLT1、CysLT2受体和GPR17，并存在明显的共定位;炎症诱导剂LPS能够诱导CysLT2受体聚集和内移，CysLT2受体选择性激动剂引起的CysLT2受体聚集和内移有待进一步确认。