沙丁胺醇直接竞争ELISA检测方法的建立及其在人群内暴露水平检测中的应用

摘要

现今社会，伴随着经济的高速发展，环境污染问题日趋严峻，现已成为全球性广泛关注的问题之一。环境污染对人类的健康水平有着非常重要的影响，目前我国针对环境污染物主要为外暴露水平的检测。外暴露检测是检测环境样品中（空气、水源等）的污染物质，只能间接反映环境污染物在人类的暴露水平。由于人类不同的生活方式和遗传因素，造成在同样的环境下，体内的环境污染物暴露水平有所不同，导致的健康危害风险也存在差异，因此对环境污染物进行内暴露水平的检测具有更重要的意义。内暴露检测是直接检测人体生物体样本中（血液、尿液、唾液等）的污染物质的浓度，能够直接显示某一特定个体在特定的环境中的暴露水平，检测得到的数据也可以用于环境污染物与疾病相关性的研究。
　　本文研究的沙丁胺醇(salbutamol，SAL)是β-兴奋剂家庭的成员，可促进禽畜生长，减少脂肪沉积，提高禽畜瘦肉比率，常被不法养殖户添加于动物饲料中。而沙丁胺醇化学结构稳定，易在动物组织脏器中残留蓄积，进而对人类健康构成潜在威胁，因此监测沙丁胺醇在人类体内的残留量显得尤为重要。目前，检测沙丁胺醇的色谱仪器分析方法，具有耗时长、成本高、样本处理复杂、操作繁琐等缺点，难以进行大批量检测，而酶联免疫检测技术是基于抗原和抗体特异性结合的一种分析方法，具有特异性强，灵敏度高、通量高、检测时间短、检测成本低，操作简单，样本几乎无前期处理等优点，因此是环境污染物质人体内暴露检测的最佳方法。虽然目前已经有多种沙丁胺醇的ELISA检测方法被建立并报道，但那些方法均是针对农产品等外环境介质中沙丁胺醇的检测而建立的，并不适用于人体样本的检测。
　　本研究针对沙丁胺醇这种常见的环境污染物，首先合成酶标产物，经过包被、竞争、显色三步法，建立了以人体尿液为样本的直接竞争ELISA检测方法，运用该方法检测环境污染物沙丁胺醇在人群中的含量，初步反映此种污染物质在人群中的暴露水平及分布特征，建立相应的基础数据库，为环境污染物质的人体内暴露限值标准制订及对疾病的相关性研究奠定基础。
　　1.沙丁胺醇直接竞争ELISA检测方法的建立
　　目的:建立低成本、高准确率的沙丁胺醇直接竞争ELISA检测方法。方法:基于抗原抗体特异性原理，建立直接竞争ELISA检测方法，制备标准曲线，并考察方法的精密度和回收率。结果:建立的沙丁胺醇直接竞争ELISA检测方法的沙丁胺醇的半数抑制浓度为1.15 ng/mL，最低检测限为0.01 ng/mL，回收率为86.2％-112.5％，变异系数为6.23％-11.52％。结论:本研究建立的方法操作简单、特异性强、灵敏度高，可用于大量样本中环境污染物质的检测。
　　2.沙丁胺醇在人群中的内暴露水平及相关性分析
　　目的:检测沙丁胺醇在人群中的内暴露水平，初步分析沙丁胺醇与人群健康状况的相关性。方法:用本研究建立的沙丁胺醇直接竞争ELISA检测方法，检测人体尿液样本中沙丁胺醇的浓度，采用SPSS17软件对数据进行分析，并总结数据特点。结果:沙丁胺醇在1648例人体样本中检测，得到的沙丁胺醇的检出率为96％，检测范围为LOD-30.83 ng/mL。沙丁胺醇的几何平均值，中值和90分位数分别为0.50ng/mL，0.73 ng/mL和3.85 ng/mL。沙丁胺醇的浓度在非妊娠妇女中明显高于妊娠妇女(P＜0.0001)。在年龄、性别和健康状况无统计学意义。结论:沙丁胺醇在人群中有较高的检出率，充分说明沙丁胺醇内暴露检测是非常必要的，但沙丁胺醇对人体的影响还有待研究。
　　综上所述:
　　本研究对沙丁胺醇的人体内暴露的检测方法进行了探索，以抗原抗体特异性结合为基础，建立了灵敏度高、特异强且能够高通量检测的沙丁胺醇直接竞争ELISA检测方法。此外，以人体尿液为样本，应用该方法检测沙丁胺醇在人体中的内暴露水平并对其与人体健康状况进行相关性分析，充分说明沙丁胺醇内暴露检测的必要性，也验证了本研究建立的方法对大批量检测的可行性。此外，本研究还建立了对人体沙丁胺醇的内暴露水平相应的基础数据，为今后沙丁胺醇的限量研究提供了参考。

目录

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致谢

摘要

缩写、符号清单、术语表

第一章 绪论

第二章 沙丁胺醇直接竞争ELISA检测方法的建立

2．1 前言

2．2 实验材料、仪器

2．3 实验步骤与实验方法

2．4 实验结果

2．5 实验讨论

第三章 沙丁胺醇在人群内暴露水平检测中的应用

3．1 前言

3．2 实验材料、仪器

3．3 实验步骤与实验方法

3．4 实验结果

3．5 实验讨论

本研究创新点

参考文献

综述 沙丁胺醇内暴露检测技术研究进展

作者简介