杨梅果实黄酮糖苷类物质分离纯化及其抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

摘要

本文以杨梅（MyricarubraSieb.etZucc.）果实为材料，评价了19个品种果实提取物的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性，分离纯化了主要黄酮糖苷类化合物，并对不同产物进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化评价。主要结果如下:
　　不同品种果实提取物对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性有显著差异。在终浓度为5mg/mL时，‘木叶’果实提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为83.95％，‘丁岙’的抑制率仅为40.57％。受试的19个品种中，‘木叶’、‘荸荠’、‘晚稻’等12个品种的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50在2.12-2.90mg/mL之间;‘小叶细蒂’、‘早炭梅’和‘丁岙’等7品种的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50在3.12-7.86mg/mL之间。α-淀粉酶抑制活性分析表明，在终浓度为10mg/mL时，受试的19个品种中，‘浪荡子’‘早炭梅’和‘丁岙’的α-淀粉酶抑制率较低，仅17.41-23.23％，其余品种的α-淀粉酶抑制率均大于50％，抑制率在54.62-71.27％。
　　利用固相萃取柱和半制备高效液相色谱联用技术，建立了从‘荸荠’果肉中快速有效分离矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)、杨梅苷、金丝桃苷和槲皮苷等四种黄酮糖苷类化合物的纯化体系。经C18Sep-Pak(@)固相萃取柱分离后得到富含C3G的10％分段组分和富含黄酮醇的50％分段组分，C3G纯度由0.74％增加至54.12％，杨梅苷、金丝桃苷和槲皮苷纯度分别由0.02％、0.06％和0.03％增加至2.42％、7.75％、3.84％，回收率均在70％以上;经半制备高效液相进一步纯化后，C3G的纯度达到了99.17％，杨梅苷、金丝桃苷和槲皮苷的纯度均在90％以上。
　　对杨梅不同品种的固相萃取分段提取物及纯化后的4种黄酮糖苷类单体进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化研究。结果表明，不同杨梅的50％分段提取物均具有远高于阳性对照阿卡波糖的α-葡萄糖苷酶抑制活性;C3G、杨梅苷、金丝桃苷和槲皮苷四种黄酮糖苷类化合物单体均具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性;在终浓度为2mg/mL时，C3G对α-葡萄糖苷酶抑制率为65.41％，杨梅苷、金丝桃苷、槲皮苷对α-葡萄糖苷酶抑制率分别为83.60％、78.59％、73.20％;此外，‘荸荠’果实粗提物的抗氧化活性与四种黄酮糖苷含量呈显著正相关关系。

目录

声明

致谢

摘要

缩略语表

1 文献综述

1．1 黄酮糖苷类化合物的分类和分布

1．1．1 花色苷类物质及其在水果中的分布

1．1．2 黄酮醇类物质及其在水果中的分布

1．1．3 其他黄酮糖苷类物质

1．2 黄酮糖苷类物质的分离纯化

1．2．1 柱层析

1．2．2 高速逆流色谱

1．2．3 制备型HPLC

1．3 α-葡萄糖苷酶抑制剂在治疗糖尿病方面的作用

1．3．1 糖尿病概述

1．3．2 碳水化合物的消化和吸收

1．3．3 α-葡萄糖苷酶抑制剂的作用机理

1．3．4 黄酮糖苷类物质抑制α-葡萄糖苷酶活性

1．4 研究目标与研究内容

1．4．1 研究目标

1．4．2 研究内容

2 不同品种杨梅果实α-葡萄糖苷酶抑制活性评价

2．1 材料、仪器与试剂

2．1．1 实验材料

2．1．2 主要仪器与试剂

2．2 实验方法

2．2．1 杨梅果实粗提物的制备

2．2．2 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定

2．2．3 α-淀粉酶抑制活性的测定

2．2．4 统计学分析

2．3 结果与分析

2．3．1 α-葡萄糖苷酶抑制活性评价

2．3．2 α-淀粉酶抑制活性评价

2．4 讨论

3 ‘荸荠’果实四种黄酮糖苷类物质的纯化

3．1 材料、仪器与试剂

3．1．1 实验材料

3．1．2 主要仪器与试剂

3．2 实验方法

3．2．1 提取溶剂的确定

3．2．2 样品液的制备

3．2．3 HPLC分析

3．2．4 固相萃取柱的动态试验

3．2．5 固相萃取柱粗提物粉末的制备

3．2．6 半制备HPLC进一步分离纯化黄酮糖苷类物质

3．2．7 LC-MS鉴定

3．2．8 统计分析软件

3．3 结果与分析

3．3．1 提取溶剂的确定

3．3．2 外标法测标准曲线

3．3．3 SPE柱吸附C3G的动态实验

3．3．4 SPE柱洗脱黄酮醇类化合物的浓度确定

3．3．5 SPE柱的初步纯化结果

3．3．6 半制备HPLC的进一步纯化

3．3．7 LC-MS对黄酮糖苷类物质的鉴定

3．3．8 两步纯化后结果分析

3．4 讨论

4 不同杨梅纯化产物α-葡萄糖苷酶抑制活性评价

4．1 材料、仪器与试剂

4．1．1 实验材料

4．1．2 主要仪器与试剂

4．2 实验方法

4．2．1 杨梅不同分段组分的制备

4．2．2 α-葡萄糖苷酶体外抑制作用实验

4．2．3 抗氧化活性评价

4．2．4 统计学分析

4．3 结果与分析

4．3．1 不同杨梅分段组分α-葡萄糖苷酶抑制活性评价

4．3．2 四种黄酮糖苷类单体α-葡萄糖苷酶抑制活性评价

4．3．3 抑制类型的确定

4．3．4 抗氧化活性评价

4．4 讨论

5 小结与展望

5．1 小结

5．2 展望

参考文献

作者简介及在学期间所取得的科研成果