杭州地区单核细胞增生李斯特菌食品分离株血清与分子型别特征的研究

摘要

目的:
　　单核细胞增生李斯特菌是一种常见的食源性致病菌，可以引起免疫力低下或缺陷患人群患李斯特菌病。本课题研究杭州地区单核细胞增生李斯特菌食品分离株的分子型别特征，了解地区流行株的情况，构建食品分离株的分子型别数据库，为李斯特菌病的食源性溯源提供实验室依据。
　　方法:
　　1.采用血清凝集和PCR血清分型的方法对杭州地区2003～2016年分离自生畜肉、生禽肉、熟肉制品、即食凉拌菜、生食水产品、预加工肉制品等类别食品的单核增生李斯特菌共133株进行血清鉴定。
　　2.检测分离株的hly4毒力基因携带情况。
　　3.采用脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)和多位点序列分型(MLST)的方法对杭州地区单核细胞增生李斯特菌进行分子分型。
　　4.对单核细胞增生李斯特菌MLST数据库数据构建物种管家基因最小生成树和系统发生树。
　　结果:
　　1.133株单核细胞增生李斯特菌可分为6个血清型，分别为1/2a(40.60％)、1/2c(24.06％),1/2b(21.80％)、4b(11.28％)、4c(1.50％)、4a(0.75％)。用血清凝集和PCR血清分型的方法对LineageⅠ和LineageⅡ2个谱系的鉴别结果一致。
　　2.133株菌株PFGE实验用AscⅠ酶切可获得33个PFGE型别，131株菌株(2株酶切降解)用ApaⅠ酶切可获得43个PFGE型别。2种酶的辛普森指数分别为0.950和0.968。相同带型的菌株没有食品类别和分离时间的相关性。AscⅠ酶切方法菌株不易降解，但条带数少，存在不同血清型的菌株聚类一致的情况。ApaⅠ酶切方法存在个别LineageⅢ/Ⅳ型菌株降解的情况，条带数多，可获得更高分辨率，对H抗原聚类一致性更好。杭州分离株的带型与国外近年来发生的食源性暴发事件分离菌株的带型不一致。
　　3.用MLST方法可以获得19个MLST型，本地流行型别为ST9和ST121。ST9均为1/2c血清型，ST121均为1/2a型血清型，LineageⅡ的菌株MLST型别和血清型的一致性高于LineageⅠ的菌株。ST767为新发现的本地衍生自ST9的型别。
　　4.最小生成树显示本地单核细胞增生李斯特菌食品流行株MLST型别与国际上流行型别一致。管家基因的系统生成树显示LineageⅠ、Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ在进化上各自形成聚类，LineageⅡ和LineageⅢ/Ⅳ在进化上关系较远，2者与LineageⅠ更为相接近。
　　结论:
　　PCR血清分型的方法与传统的血清凝集具有较好的一致性，可以在实际工作中使用于主要谱系LineageⅠ和LineageⅡ的菌株血清型鉴定。杭州地区单核细胞增生李斯特菌食品分离株分子型别分布广泛，主要流行株型别与国际上的主要型别基本一致，但也存在本地衍生株。食品中单核细胞增生李斯特菌的污染比较严重，应加强监测与管理以防食源性疾病的发生。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词表

1 引言

2 材料与方法

2．1 主要仪器

2．2 主要试剂

2．3 实验菌株和对照菌株

2．4 方法

3 结果

3．1 血清凝集结果

3．2 hlyA毒力基因检测

3．3 PFGE分型结果

3．4 MLST分型结果

3．5 单核细胞增生李斯特菌MLST种群最小生成树

3．6 单核细胞增生李斯特菌管家基因系统发生树

4 讨论

5 结论

参考文献

单核细胞增生李斯特菌表型和分子分型方法

作者简历及在学期间所取得的科研成果