糖肾饮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞TGF-β表达的影响

摘要

目的：糖尿病肾病是糖尿病的一种严重血管并发症，是导致慢性肾功能衰竭的重要因素，也是引起糖尿病患者死亡的主要原因，其发病机制还未完全明了，目前的研究认为糖尿病肾病与遗传易感因素、氧化应激、肾小球外细胞基质堆积、多种细胞因子表达异常、糖基化终末产物产生过多、凝血机制异常等有关，其中长期高血糖是糖尿病肾病发生的关键原因，高血糖造成肾脏血流动力学改变以及葡萄糖本身代谢异常所致的一系列后果是造成肾脏病变的基础，生长因子、细胞因子激活则是病变形成的直接机制。在被激活的各种生长因子中，转化生长因子-β1是参与糖尿病肾病细胞外基质积聚、肾小球纤维化等关键的因子，TGF-β1可促进肾小球中功能活跃的系膜细胞分泌多种细胞外基质，研究表明阻断TGF-β1可以明显减轻糖尿病肾脏病变。迄今为止尚未发现能非常有效地阻止糖尿病肾病进程的西药，我国一直在进行中医药治疗糖尿病肾病的研究并取得一定进展，近年研究发现，多种中药成分可防治糖尿病肾病，但目前中医药对糖尿病肾病治疗作用的研究大多是单味药的机理研究，不能体现中药多组分、多靶点和多系统作用的优势，中药复方可通过多途径、多环节发挥对糖尿病肾病的治疗作用。糖肾饮是一种复方制剂，已有临床实践证实糖肾饮对糖尿病肾病有显著疗效，但机制未阐明。本实验通过观察糖肾饮含药血清对高糖环境下肾系膜细胞TGF-β1蛋白浓度的影响，探讨糖肾饮治疗糖尿病肾病的可能机制，为其临床应用提供理论基础和实验依据。 方法：糖肾饮(组方：生地黄30g、山药15g、茯苓10g、赤芍15g、泽泻5g、山萸肉10g、黄连5g、葛根10g)水煎并浓缩至含生药2g/mL，采用正常Wistar雄性大鼠5只，每日分别灌喂糖肾饮2mL，每日1次，连续14天，于末次给药2h后，用5％水合氯醛1ml/100g行腹腔麻醉，剖腹后于下腔静脉处取血，离心取血清并保存，为含糖肾饮大鼠血清。另采用正常Wistar大鼠5只，每日分别灌喂生理盐水2mL，每日1次，连续14天，于末次给生理盐水2h后，用5％水合氯醛1ml/100g腹腔麻醉后于下腔静脉处取血，离心取血清，为正常大鼠血清。取对数生长期的肾小球系膜细胞配成细胞数为3×104/ml转接种于24孔板上，每孔1ml。贴壁生长24h以后，加无血清的培养基，24h以后细胞基本同步化。按加入的大鼠血清及葡萄糖浓度把肾小球系膜细胞分为8组，其中，A组：含10％正常大鼠血清，葡萄糖5.6mmol/L；B组：含10％正常大鼠血清，葡萄糖30mmol/L；C组：含20％正常大鼠血清，葡萄糖5.6mmol/L；D组：含20％正常大鼠血清，葡萄糖30mmol/L；E组：含10％糖肾饮血清，葡萄糖5.6mmol/L；F组：含10％糖肾饮血清，葡萄糖30mmol/L；G组：含20％糖肾饮血清，葡萄糖5.6mmol/L；H组：含20％糖肾饮血清，葡萄糖30mmol/L；根据实验分组的不同加入相应的培养液。每组设2个平行孔，培养48h后收集上清，采用ELISA法测定每孔上清液TGF-β1的浓度。 结果：各组检测TGF-β1浓度的结果如下：A组：5.16±0.38ng/ml；B组：9.62±0.45ng/ml；C组：5.72±0.69ng/ml；D组：10.99±0.53ng/ml；E组：5.09±0.31ng/ml；F组：5.41±0.35ng/ml；G组：5.21±0.50ng/ml；H组：4.26±0.34ng/ml。B组与A组、D组与C组、F组与B组、H组与D组、H组与F组比较差异具有显著性(P=0)。A、C、E、G组各组间比较无显著性差异(P＞0.05)。 结论：正常葡萄糖浓度下肾小球系膜细胞可表达一定水平的TGF-β1，糖肾饮抑制高糖环境下大鼠肾系膜细胞高分泌TGF-β1，高浓度含药血清较低浓度含药血清作用显著。降低高糖环境下TGF-β1的浓度可能是糖肾饮抑制细胞外基质积聚、减轻肾小球纤维化、治疗糖尿病肾病的重要机制之一。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

附录：研究生学习期间完成的论文和科研工作

致谢

中西医研究糖尿病肾病进展