流行性乙型脑炎患儿血及脑脊液中神经肽Y、IL-8变化的研究

摘要

目的：流行性乙型脑炎即乙脑(encephalitisB，EpidemictypeBencephalitis，ETBE)是以中枢神经系统损害为主的急性传染病，也是一种人畜共患的自然疫源性疾病，以2～7岁儿童发病率最高，有很高的病死率、病残率。目前临床上尚无特效的治疗药物。因此，寻求与乙脑病情及预后密切相关的指标以指导临床治疗就显得尤为重要。白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)是一种中性粒细胞、T淋巴细胞以及嗜碱性粒细胞的趋化因子，是中性粒细胞激活和迁移的重要调节因子和进入损伤组织的重要介质，在损伤病理中起重要作用。研究表明，脑损伤时脑脊液中IL-8的浓度比外周血浆高，说明此时受损脑组织是IL-8的主要来源。神经肽Y(NeuropeptideY,NPY)又称神经肽酪氨酸，是由36个氨基酸残基组成的活性多肽，广泛分布于中枢神经系统，它在神经细胞内合成后被输送至神经末梢作为一种神经递质与经典神经递质共存，与学习记忆、运动行为、昼夜节律、摄食和饮水、内分泌等多项功能有关。多项研究发现，该物质与脑卒中、癫痫、脑外伤等中枢神经损伤有密切关系。本研究通过测定流行性乙型脑炎患儿血及脑脊液中极期和恢复期神经肽Y、白细胞介素-8的水平，观察NPY和IL-8在流行性乙型脑炎中的变化，研究该变化与病情及预后的关系，探讨其在流行性乙型脑炎发病中的作用，从而为寻找有效的临床诊治方案提供理论依据。 方法：研究对象分两组，观察组为43例乙型脑炎患儿，并按病情轻重分为普通型(22例)和重型(21例)，对照组血清取自25例与观察组年龄、性别无差异(P＞0.05)的健康查体儿童，对照组血浆取自26例与观察组年龄、性别无差异(P＞0.05)的健康查体儿童，对照组脑脊液取自非感染性疾病、非神经系统疾病、非肿瘤、非自身免疫性疾病、非心脏手术的与观察组年龄、性别无差异的15例手术儿童。观察组分别于极期和恢复期常规采集静脉血4ml，分两份分别注入含10％EDTA二钠30μl以及抑肽酶40μl的试管和血常规采血管中，4℃3000rpm离心10分钟，分别分离血浆和血清，Ep管中保存待测。并同时收集极期脑脊液2ml，注于Ep管中保存待测。对照组每例采静脉血1次4ml，分别分离血清血浆。作为极期及恢复期之对照。对照组脑脊液取自符合上述条件的手术儿童，仅取1次，约2ml置于Ep管。所有标本置于-70℃冰箱冻存，一次性检测。用IgM抗体捕获酶联免疫法检测观察组和对照组血清特异性IgM抗体；用放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)检测观察组和对照组血清及脑脊液IL-8、NPY水平。NPY测定采用非平衡法，按说明书依次加缓冲液、标准品、样品、抗血清摇匀置4℃48h后加125I-NPY摇匀置4℃24h再加PR试剂混匀，室温放置20min，4℃3500rpm离心25min，吸弃上清液，在γ计数器上测定cpm数。以B/T计算NBS、S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测样品结合百分率，绘制标准曲线查出样品值或由自动γ计数器直接给出有关参数、标准曲线及样品浓度。IL-8采用非平衡法，各试管按说明书依次加缓冲液、标准品、标本、125I-IL-8、IL-8抗血清，混匀4℃温育24h，加免疫分离剂混匀于室温放置20min，然后4℃3500rpm离心25min弃上清液测出cpm绘制标准曲线，查出样品值。所有实验数据采用SPSS13.0ForWindows软件包进行统计，实验结果以(-x)±s表示，各组均数用单因素方差分析，相关分析用直线相关与回归，动态分析用两样本配对t检验，P＜0.05认为有统计学意义。 结果：①.特异性IgM抗体检测结果：观察组血清抗乙型脑炎病毒特异性IgM抗体阳性率达100％，对照组阳性率为0％。②.NPY水平：极期普通型及重型血浆NPY水平明显高于对照组(普通型与对照组相比P=0.047＜0.05，重型与对照组相比P=0.000＜0.01)，脑脊液NPY水平明显高于对照组(普通型与对照组相比P=0.000＜0.01，重型与对照组相比P=0.000＜0.01)，且重型观察组血浆及脑脊液NPY水平均明显高于普通型(血浆中P=0.035＜0.05，脑脊液中P=0.022＜0.05)；恢复期观察组普通型、重型与对照组血浆中NPY水平两两比较均无显著性差异(普通型与重型比较P=0.101＞0.05，普通型与对照组比较P=0.114＞0.05，重型与对照组比较P=0.884＞0.05)，脑脊液中NPY水平观察组仍高于对照组(P=0.000＜0.01)，重型与普通型比较无差异(P=0.096＞0.05)；恢复期普通型、重型NPY水平较极期均明显降低(血浆普通型P=0.000＜0.01，重型P=0.003＜0.01；脑脊液普通型P=0.023＜0.05，重型P=0.000＜0.01)；观察组极期血浆与脑脊液中NPY水平变化呈正相关(r=0.600,P=0.000＜0.05)。③.IL-8水平：极期血清、脑脊液IL-8水平明显高于对照组(血清中普通型与对照组相比P=0.000＜0.01，重型与对照组相比P=0.000＜0.01；脑脊液中普通型与对照组相比P=0.000＜0.01，重型与对照组相比P=0.000＜0.01)，且重型观察组血清及脑脊液IL-8水平均明显高于普通型(血清中重型与普通型相比P=0.033＜0.05，脑脊液中重型与普通型相比P=0.003＜0.05)，恢复期普通型及重型无论血清还是脑脊液IL-8水平较极期均明显降低(血清中P=0.000＜0.01，脑脊液中P=0.000＜0.01)，恢复期普通型和重型及对照组血清IL-8水平比较无显著性差异(普通型与重型P=0.656＞0.05,普通型与对照组P=0.068＞0.05)，但重型仍高于对照组(P=0.025＜0.05)，普通型与重型脑脊液中IL-8水平比较无显著性差异(P=0.609＞0.05)，但仍高于对照组(P=0.000＜0.01)；观察组极期血清及脑脊液中IL-8水平变化呈正相关(r=0.328，P=0.032＜0.05)。④.极期血清及脑脊液中NPY与IL-8水平之间无相关性(脑脊液r=0.066，P=0.672＞0.05，血中r=-0.067，P=0.670＜0.01)。 结论：①.血清与脑脊液中NPY、IL-8水平测定对乙型脑炎患儿脑损伤程度及免疫状态的判断有重要参考价值，可作为估计病情及预后的重要指标。②.NPY、IL-8均参与了流行性乙型脑炎的病理过程。③.NPY有可能对乙型脑炎患儿机体起保护作用。④.NPY与IL-8水平变化在流行性乙型脑炎病理过程中无明显相关性。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

流行性乙型脑炎病毒研究进展 综述

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