高温胁迫下坛紫菜中红藻糖苷含量变化以及相关抗逆基因的表达

摘要

本文建立了高效液相色谱三重四级杆质谱联用技术检测红藻中红藻糖苷和异红藻糖苷含量的方法。校准曲线相关系数大于0.9993，线性关系良好；红藻糖苷和异红藻糖苷的检出限分别为0.05和0.20ng/mL；其定量限分别为0.10和0.40ng/mL；回收率为75.7％-76.8%；日内和日间精密度相对标准偏差低于8.5%（n=5）。
　　应用该方法检测了海萝Gloiopeltis furcata(Postels&Ruprecht) J. Agardh、坛紫菜 Pyropia haitanensis、茎刺藻 Caulacanthus okamurai Yamada、小石花菜Gelidium divaricatum Martens、扇形叉枝藻 Gymnogongrus flabelliformis Harve-y、蜈蚣藻 Grateloupia filicina(J.V. Lamouroux) C. Agardh和环节藻 Champia parvula(C. Agardh) Harvey等7种分布于潮间带不同潮位的红藻中红藻糖苷及异红藻糖苷的含量。结果表明：红藻糖苷含量与藻体所处潮位相关，潮位越低，红藻中红藻糖苷含量越低，仅于海萝及坛紫菜中检出异红藻糖苷。
　　对坛紫菜中红藻糖苷和异红藻糖苷的分析结果表明：同一品系不同养殖海区的坛紫菜在相同生长期内藻体中红藻糖苷含量基本稳定，约为0.61-0.66mg/g，P>0.05，而异红藻糖苷含量为6.14-7.31mg/g，差异显著（P<0.05）。随着生长日龄增长，鹤浦海区栽培的Me-05品系坛紫菜中红藻糖苷含量从从 I组（丝状体）到 II组（日龄45天）、Ⅲ组（日龄75天）、Ⅳ组（日龄135天）依次降低，其中丝状体和幼嫩组中红藻糖苷含量明显高于后面两个阶段（P<0.01）；而异红藻糖苷含量在 II组中最高。
　　采用35℃热激30min处理坛紫菜叶状体，测定热激后、恢复培养1h和3h时藻体中红藻糖苷和异红藻糖苷的变化。结果显示热激导致藻体中红藻糖苷含量微量下降，而在恢复过程中逐渐升高至对照组近2倍（P<0.01）；该过程中，异红藻糖苷变化不明显（P>0.05）。热激后，不同生长阶段的坛紫菜中红藻糖苷变化量从Ⅲ组、Ⅳ组、II组到 I组依次降低（P<0.01），而且抗高温品系申福1号（V组，45day）经热激后藻体中红藻糖苷含量变化幅度显著高于 II组Me-05品系（P<0.05）。各组异红藻糖苷热激前后含量变化不明显（P>0.05）。
　　利用Realtime qPCR技术研究热激后坛紫菜抗逆相关基因的表达。热激后，红藻糖苷代谢相关基因 Phnho1和 Phgpdh的表达量显著升高，与恢复过程中检测到的红藻糖苷含量升高相吻合。而 hsp70、Mn-sod、rboh等分子伴侣与自由基清除相关酶基因的表达也明显上调。
　　结果提示：同一品系相同生长阶段的坛紫菜中红藻糖苷含量基本稳定，而且，红藻糖苷作为渗透调节物质与活性氧清除系统共同参与了坛紫菜的抗热应激反应，其含量与变化能力可能与坛紫菜抗热能力正相关，即红藻糖苷含量越高，变化能力越大，其抗热性越好。异红藻糖苷在其中的作用尚不明确，有待进一步研究。

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引言

1绪论

1.1红藻糖苷的研究进展

1.2液质联用技术在代谢组学研究中的应用

1.3高温胁迫对紫菜的影响及其相关抗逆基因的研究进展

2高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS）法检测红藻中的红藻糖苷和异红藻糖苷的含量

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3实验结果

2.4讨论

3高温胁迫下坛紫菜中红藻糖苷含量变化

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3实验结果

3.4讨论

4高温胁迫下坛紫菜抗逆相关基因的差异表达

4.1实验材料

4.2实验方法

4.3实验结果

4.4讨论

本章小结

5结论

参考文献

在学研究成果

致谢