碳酸酐酶IV在胃癌发生中的作用机制研究

摘要

一、目的：
　　胃癌是全球死亡率极高的恶性肿瘤之一，而我国正是胃癌高发地区。由于作用因素复杂，胃癌的发病机制仍不十分明了。目前已有研究表明碳酸酐酶家族(carbonic anhydrases，CAs)在人类肿瘤的发生发展中扮演着非常重要的角色，其中碳酸酐酶IV(carbonic anhydrase IV，CA4)在肠癌中就是通过靶向WTAP–WT1–TBL1抑制Wnt通路而发挥抑癌效应。鉴于此，本论文以胃癌作为研究对象，收集临床样本并采用多种生物学实验技术，希望阐明CA4在胃癌发生中所发挥的生物学功能，为胃癌的发病机制提供新的理论依据。
　　二、方法：
　　1.采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（real-time reverse transcription-PCR，qRT-PCR）和蛋白免疫印迹技术（Western blot，WB）检测CA4是否在胃癌及癌旁组织和胃正常细胞株GES-1及癌细胞株AGS中是否存在差异性表达。
　　2.采用焦磷酸测序技术检测GES-1和AGS中CA4基因甲基化状态。
　　3.构建CA4过表达质粒，转染至GES-1和AGS细胞中，然后分别采用流式细胞仪（flow cytometer）、实时细胞分析仪（Real-Time Cell Analyzer，RTCA）和细胞克隆形成实验检测细胞周期和增殖的变化。
　　4.上调 CA4在 GES-1和 AGS细胞中的表达后，应用 WB检测细胞周期相关蛋白CDK2表达水平。
　　三、结果：
　　1.相对于癌旁组织和胃正常粘膜细胞株 GES-1，胃癌癌组织标本和癌细胞株AGS均呈低表达。
　　2. AGS细胞CA4基因CpG岛甲基化率高于GES-1。
　　3.上调CA4在GES-1和AGS细胞中的表达即可抑制细胞增殖也可阻滞细胞周期。
　　4.过表达CA4可以抑制GES-1和AGS细胞中CDK2的表达。
　　四、结论：
　　本实验结果证实，与胃癌癌旁组织和正常胃粘膜细胞相比，胃癌癌组织和癌细胞中CA4均呈低表达，并且AGS细胞中CA4基因CpG岛甲基化率高于GES-1。通过CA4质粒脂质体转染，发现，过表达CA4可以抑制细胞增殖和阻滞细胞周期，并且细胞周期相关蛋白CDK2呈相应下调。总之，在胃癌发生过程中，CA4可能通过调控细胞CDK2的表达而阻滞细胞周期，同时，CA4具备作为胃癌肿瘤标志物的潜在价值。

目录

声明

引言

1. 研究内容和实验技术

1.1研究内容

1.2.技术路线

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

3 实验结果

3.1质粒构建

3.2利用生物信息学预测CA4与胃癌的相关性

3.3胃癌细胞AGS和正常胃粘膜上皮细胞GES中CA4基因甲基化水平

3.4检测CA4在胃癌组织及细胞中的表达水平

3.5 检测CA4质粒转染效果

3.6过表达CA4对胃癌细胞增殖能力的影响

3.7 CA4通过调控细胞周期来影响胃癌细胞的增殖

3.8 CA4通过抑制CDK2调控细胞周期

4. 讨论

5. 结论

参考文献

附录A 综述:碳酸酐酶IV与人类疾病

附录B 在校研究成果

致谢