鹅皮胶原蛋白抗氧化肽及胶原蛋白复合膜应用的研究

摘要

我国是世界上养鹅大国，其年出栏量约占世界的80％，并且每年鹅养殖量总体呈现上涨的趋势。浙东白鹅作为地方优势品种，在浙江地区养殖范围较广。鹅皮中含有丰富的胶原蛋白，胶原蛋白经水解后可形成具有多种生物活性的胶原蛋白肽，而抗氧化性是胶原蛋白肽重要的功能活性之一。本文以新鲜鹅皮为原料，利用胃蛋白酶酶解法提取鹅皮胶原蛋白，通过可控酶解技术采用分步酶解法制备抗氧化性胶原蛋白肽，利用体外化学模型和细胞模型综合评价胶原蛋白肽的抗氧化活性，最后将提取的胶原蛋白制备胶原蛋白-壳聚糖可食性复合膜，用于肉品的保鲜。
　　首先，利用已有的提取工艺提取胶原蛋白，确定了采用木瓜+风味蛋白酶复合酶和碱性蛋白酶分步水解法制备鹅皮胶原蛋白肽生产工艺条件。本试验采用单因素方差分析优化二次酶解的水解用酶；在单因素试验的基础上，采用响应曲面法确定最佳 pH、酶解温度和酶解时间。结果表明，在胶原蛋白的二次酶解中，以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性较好，碱性蛋白酶的最优酶解条件为pH8.96、酶解温度为49.27℃、酶解时间为5.68 h，此时所得多肽还原力达到13.56×10-2，较优化前提高了3.51%。
　　其次，采用葡聚糖G-50凝胶过滤层析在220 nm处对酶解产物进行分离、纯化，收集得到 A、B、和 C三个分离组分，浓缩干燥后对各个组分进行体外抗氧化性测定，试验结果显示胶原蛋白肽C组分对DPPH自由基、O2-自由基和OH自由基清除能力、Fe3+还原能力均高于A、B组分。
　　再次，以小肠上皮细胞(IEC-6细胞)为研究对象，建立H2O2诱导IEC-6细胞氧化损伤模型，探究鹅皮胶原蛋白肽C组分对H2O2诱导的IEC-6细胞氧化损伤的保护机制。试验结果表明：胶原蛋白肽浓度范围在50-200 mg/L时，对IEC-6细胞无明显细胞毒性作用；使用含有鹅皮胶原蛋白肽C组分的完全培养液培养 IEC-6氧化损伤细胞时，与胶原蛋白肽浓度为0 mg/L试验组相比，细胞活力增强(p<0.05)，丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量显著下降(p<0.05)，乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)释放率减少(p<0.05)；IEC-6细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、过氧化氢酶(catalase，CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)抗氧化酶活性增加，此研究显示胶原蛋白肽能够对H2O2诱导的IEC-6细胞氧化损伤起到保护作用。
　　最后，以胶原蛋白和壳聚糖为原料，制备了胶原蛋白-壳聚糖可食性复合膜，用于鸭肉的保鲜。本试验显示壳聚糖含量少于40%时，随壳聚糖含量的增加，复合膜水蒸气透过系数明显降低；当壳聚糖含量超过40%时，水蒸气透过系数趋于稳定；复合膜的拉伸强度随壳聚糖含量增加，呈先增加后减少的趋势，当胶原蛋白与壳聚糖比为4:6时复合膜的拉伸强度为36.05 MPa；复合膜的断裂伸长率随壳聚糖含量增多而增大；对新鲜鸭肉进行胶原蛋白-壳聚糖复合膜涂膜处理，降低了鸭肉贮藏过程中 TVB-N含量，提高了肉品的品质，具有保鲜效果。

目录

声明

引言

1绪论

1.1胶原蛋白及肽概述

1.2胶原蛋白及其肽的应用

1.3胶原蛋白肽抗氧化功能的研究

1.4立题意义与研究内容

2鹅皮胶原蛋白肽的制备

2.1材料与方法

2.2结果与分析

2.3讨论

2.4结论

3胶原蛋白肽的分离纯化及抗氧化活性测定

3.1材料与试剂

3.2仪器与设备

3.3试验方法

3.4结果与分析

3.5结论

4鹅皮胶原蛋白肽对H2O2诱导的IEC-6细胞氧化损伤的保护作用

4.1材料与方法

4.2结果与分析

4.3讨论

4.4结论

5胶原蛋白-壳聚糖膜的制备与应用

5.1材料与方法

5.2结果与分析

5.3结论

6总结

6.1研究结论

6.2研究展望

参考文献

在学研究成果

致谢