WIP1在端粒功能障碍引起的干细胞衰老及骨髓衰竭中的作用

摘要

WIP1(Wild-type p53-induced phosphatase)是一癌基因，在众多癌症细胞中高表达，同时是p53负反馈调节环路的重要组成成分，参与调控细胞的稳态平衡。已有的研究发现， p53及其上下游基因在端粒依赖的衰老进程中起重要作用。然而，对于WIP1基因在端粒功能障碍而引起的衰老过程中的调节作用还不清楚。我们通过杂交，建立WIP1和Terc双基因敲除小鼠品系。进一步互交，建立WIP1基因缺失的G3Terc-/-(第三代端粒酶缺失)小鼠。在此基础上，利用外周骨髓分析、体内造血重建实验以及竞争性骨髓移植实验等手段，对WIP1和Terc双基因敲除小鼠的成年鼠及衰老小鼠的HSC的功能研究。
　　 实验结果显示WIP1敲除能够延长端粒酶缺失G3小鼠的寿命。WIP1缺失没有改善G3小鼠骨髓中M细胞(CD11b+)，B细胞(B220+)，CD4+T，CD8+T的比例。在干细胞水平，WIP1缺失的G3小鼠中最纯的干细胞(SLAM)数目较G3小鼠明显增加，而长期造血干细胞(LT)，短期造血干细胞(ST)的数目没有改变。在祖细胞水平，共同髓系祖细胞(CMP)，粒细胞髓系祖细胞(GMP)，巨核细胞红系祖细胞(MEP)以及共同淋系祖细胞(CLP)的数目没有变化。骨髓竞争性移植实验和干细胞竞争性移植实验结果显示，供体为G3WIP1-/-来源的小鼠骨髓长期造血干细胞造血重建能力低于G3小鼠。提示WIP1缺失没有改善G3小鼠的造血重建能力。在对脾脏的中M细胞(CD11b+)，B细胞(B220+)，CD4+T，CD8+T的分析结果显示，WIP1缺失没有改善G3小鼠的脾脏中髓系浸润现象。其他组织器官的称重结果显示，与G3小鼠相比，G3WIP1-/-小鼠脾脏，大脑，肝脏的重量没有变化，肾脏，心脏，雄性小鼠的睾丸重量有明显的增加。结果提示，WIP1缺失延长端粒功能障碍小鼠的寿命，但是没有改善造血系统的衰老。

目录

声明

致谢

摘要

1．引言

2．材料与方法

2．1．实验动物、试剂及相关仪器

2．1．1 实验动物

2．1．2 试剂

2．1．3 主要实验仪器

2．2 实验方法

2．2．1 G3WIP1双基因敲除小鼠的建立及PCR方法鉴定小鼠基因型

2．2．2 骨髓细胞，脾脏细胞的分离

2．2．3 流式细胞仪分析骨髓淋系及髓系细胞

2．2．4 流式细胞仪分析骨髓长期造血干／祖细胞比例

2．2．5 磁珠法富集造血干细胞及进一步染色分析／分选

2．2．6 骨髓造血干细胞自我更新及重建造血实验

2．2．7 流式细胞仪分析外周血中各系细胞数量和比例

2．2．8 统计学分析

3．实验结果

3．1 PCR鉴定G3WIP1小鼠基因型

3．2 WIP1敲除能够延长端粒酶缺失小鼠的寿命

3．3 WIP1敲除没有改善G3骨髓中的BMT比例

3．4 WIP1缺失的G3小鼠中骨髓干／祖细胞的数目分析

3．5 竞争性移植实验检测WIP1敲除后G3 HSC(造血干细胞)自我更新和造血重建能力

3．6 长期造血干细胞移植实验检测WIP1敲除G3小鼠HSC自我更新和造血重建能力

3．7 WIP1敲除没有改善脾脏中髓系细胞入侵

3．8 组织器官称重

4．讨论

5．结论

参考文献

附录