牙种植术后种植体周围龈下微生物种群的动态研究

摘要

目的:
　　本实验设计通过 PCR-DGGE技术对正常种植体龈沟内优势微生物群落进行动态观察。了解正常种植体周围龈下优势微生物种群与正常天然邻牙龈下优势菌群的差异,分析正常种植体周围龈下优势微生物种群的动态变化。探讨种植体周围微生物变化对种植体周围软组织的影响,为种植术后临床维护和健康干预提供参考。
　　方法:
　　利用PCR-DGGE技术,对正常种植体周龈沟液及邻近的健康天然牙龈沟液中的微生物种群进行多样性的比较分析。收集符合实验设计要求的种植体周龈沟液及邻近天然牙周龈沟液,提取其中微生物DNA,进行PCR-DGGE电泳和测序并对测到的菌种进行半定量分析。
　　结果:
　　收集过程中,每个样本量均>0.0040g,足够提取DNA。纵向对比实验组(健康种植牙)各时间段龈沟液量(P>0.05)无明显统计学差异;横向对比实验组(健康种植牙)与对照组(健康天然邻牙)龈沟液量(P>0.05)也无显著统计学差异。
　　微量样品基因组试剂盒提取到的DNA可直接用于 PCR-DGGE检测(PCR扩增效果好,DGGE电泳图条带清晰)。
　　纵向比较:健康种植体周及天然牙周围龈下微生物种群中,1-3个月多样性指数波动,部分微生物物种消失或出现,12个月时趋于稳定。横向比较:实验组龈下微生物种群在1-3个月内多样性指数波动大于天然牙,在12个月趋于稳定,无明显差异,相似性指数随时间延长而逐渐增大。
　　实验组和对照组优势微生物群落在各时期所占相对比例相似无明显差异,以厌氧菌为主。龈下微生物种群中优势微生物种群为:链球菌属、月牙形单胞菌属、韦荣球菌属、普雷沃氏菌属等。
　　结论:
　　健康种植体及天然牙周龈下微生物种群以厌氧菌为主。发现有真核生物、密螺旋体等特异性微生物及牙龈卟啉单胞菌等可疑致病菌的存在,但所占相对比例较低。
　　1-3个月时种植体周龈下菌群处于不稳定时期,微生物种群结构有所变化,微生物种类和分布具有多样性,3-12个月逐渐趋于稳定。而种植体周围龈下微生物群落中的优势微生物种群在各时期所占相对比例无明显变化,说明种植体周围龈下微生物种群结构的变化是优势微生物种群种属内部物种间的自我调节,以维持种植体周围龈下微生物种群的动态平衡。在实验各观察时期种植体及天然牙周龈下优势微生物种群相对构成比无明显差异。

目录

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中文摘要

英文摘要

前言

第一部分龈沟液样本采集

材料和方法

1 实验材料

2 实验仪器

3 实验设计

4 实验方法：

结果

讨论

第二部分样本DNA提取、PCR扩增及DGGE电泳

1 实验仪器

2 实验材料：

3 主要试剂及溶液配制

结果

1 样品DNA的提取和16rDNA的PCR扩增结果

2 变性梯度凝胶电泳（DGGE）结果

讨论

第三部分DGGE图谱分析口腔微生物种群多样性

材料及方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 DGGE图谱分析

2 多样性指数分析

3 利用 UPGMA(Unweighted pair group method using arithmetic averages)进行聚类分析。

4 测序结果：

5 对回收的DGGE条带进行半定量分析

讨论

1 种植体植入对龈下微生物种群的影响

2 龈下微生物种群相似度及聚类分析

3 口腔卫生维护的意义

4 DGGE图谱的测序结果及半定量分析

5 龈沟内检测到的细菌分析

6 PCR-DGGE技术的应用

全文总结

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