新疆地区牛病毒性腹泻/黏膜病病毒的分离鉴定

摘要

牛病毒性腹泻/黏膜病病毒（Bovine viral diarrhea virus/mucosal disease virus，BVDV/MDV）是黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属(Pestivirus)的代表种，主要引起牛病毒性腹泻/黏膜病，表现为持续性感染、免疫耐受、黏膜病、血小板减少症和出血综合症。根据牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(Bovine viral diarrhea virus/mucosal disease virus，BVDV/MDV)在细胞上培养能否引起细胞病变，分为致细胞病变(cytopathic biotype，CP)和非致细胞病变(non-cytopathic biotype，NCP)两种生物型;根据病毒5'非编码端(5'-Untranslated Regions，5'-UTR)基因序列，分为BVDV-1型和BVDV-2型两种基因型。
　　为了解牛病毒性腹泻/黏膜病病毒新疆株流行的生物型和基因型，采集有疑似症状的牛的粪便，检测BVDV并进行生物型和基因型的鉴定。
　　利用逆转录，聚合酶链式反应(RT-PCR)对采自新疆的腹泻牛粪便鉴定，扩增出一条286 bp的目的片段，初步确定为牛病毒性腹泻/黏膜病病毒。
　　对初检阳性的样品进行细胞培养，产生明显细胞病变;使用RT-PCR对细胞培养物鉴定，将扩增出的片段连接到pMD18-T载体并测序，得到一条长286 bp的5'-UTR部分序列。使用Meg Align对其分析，新疆分离株序列与VEDEVAC(AJ585412)、Osloss(M96687)、xinjiang-3156(JN4144)和Manas-1(EU555288)的同源性达到96％以上;遗传进化树结果显示，新疆分离株与VEDEVAC(AJ585412)、Osloss(M96687)、xinjiang-3156(JN4144)和Manas-1(EU555288)遗传进化关系较近，属于同一分支。
　　结果:本试验成功分离到一株牛病毒性腹泻/黏膜病病毒新疆株，在MDBK细胞上培养发生病变，基因型分析确定为BVDV-1型。

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摘要

英文缩写词表

第1章 绪论

1．1 BVDV概述

1．2 BVDV生物学特性

1．3 BVDV基因组结构

1．4 BVDV流行病学

1．5 诊断技术

1．6 BVDV防治

1．7 研究目的及意义

第2章 应用RT-PCR方法检测BVDV

2．1 材料

2．2 方法

2．3 结果与分析

2．4 讨论

第3章 分离株的分离鉴定

3．1 材料

3．2 方法

3．3 结果与分析

3．4 讨论

第4章 结论

附录

参考文献

致谢

作者简介