基因工程甲状旁腺激素(PTH)高效表达系统的构建及重组PTH对骨质疏松动物模型的治疗作用

摘要

该文利用杆状病毒表达系统对PTH基因进行了在真核细胞中的表达.将完整的PTH基因克隆到供体质粒pFastBacl中,在DH10BAC中通过size-specific转座得到重组bacmid并转染昆虫细胞,使PTH基因在真核(昆虫细胞中获得了表达,表达产量占可溶性蛋白的32.5﹪,经贸部25MG/10<'9>细胞.经C<,18>小柱纯化后,进行免疫原性和生物活性的测定并与在原核细胞中表达的PTH进行了比较.结果发现真核细胞表达的PTH在分子量大小、免疫原性方面均与天然的PTH及原核表达的PTH无显著性差异.体外生物活性测定方面,与bPTH<,1-34>标准品及原核表达PTH相近.该项研究的结果显示:1、利用原核和真核细胞成功地、高水平地表达了完整的人PTH.2、两种系统表达的重组PTH在分子量、免疫原性及体外生物活性等方面均与天然的PTH非常相似.3、在对大鼠骨质疏松的疗效方面,PTH不仅可以恢复去卵巢大鼠丢失的骨量而且以10.0nmol/Kg体重给予PTH还可以使去卵巢大鼠骨量增加并超过手术组水平;PTH增加骨量的同时改善骨的空间结构,提高骨质量;PTH的疗效在一定的范围内是剂量依赖性的;在相同剂量情况下,原核、真细胞中表达的PTH与PTH标准品具有相近的疗效;PTH是通过激活成骨细胞,刺激骨形而发挥其治疗骨质疏松作用的.

目录

实验过程示意图

第一部分 人甲状旁腺激素基因在大肠杆菌中的表达

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分 人甲状旁腺激素基因在昆虫细胞中的表达

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

第三部分 重组PTH对骨质疏松动物模型的治疗作用

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

结论

致谢

参考文献

个人简历