GenoType MTBDRplus方法对利福平耐药检测研究

摘要

目的:应用GenoType MTBDRplus方法和传统比例法，对结核分枝杆菌利福平耐药性进行检测研究对比。GenoType MTBDRplus方法采用核酸反向线性探针杂交技术检测与利福平耐药密切相关的rpoB基因，可在24小时内完成检测。传统比例法需要3个月左右完成检测，虽然方法简单、经济、易于推广，难于满足临床对结核病诊断和治疗的需求，限制了其临床的应用。GenoTypeMTBDRplus方法为早期诊断耐药结核病提供快速检测依据，利于临床早期合理治疗。
　　方法:标本来自于2011年4月至2011年9月，天津市滨海新区结核病防治所就诊涂片阳性患者的痰标本，共收集55例患者的痰标本。同一份痰标本分别进行GenoType MTBDRplus方法和传统比例法检测，检测结核分枝杆菌对利福平耐药性。GenoType MTBDRplus方法采用核酸反向线性探针杂交技术检测与利福平耐药密切相关的rpoB基因，推测其对利福平的耐药性。GenoType MTBDRplus方法检测过程包括，涂阳痰标本的处理通过碱处理-中和离心沉淀法，使用GenoLyse试剂盒提取DNA，PCR扩增，杂交，结果判读完成。传统比例法检测结核分枝杆菌利福平耐药性，通过实验材料准备，制备菌悬液和稀释，接种菌液和培养，结果报告完成。应用Kappa检验对两种方法进行一致性的统计分析。研究在天津市结核病控制中心参比室进行。
　　结果:1.55例涂阳标本中，1例经鉴定为非结核分枝杆菌(NTM)，1例培养结果为污染，1例培养阳性而GenoType MTBDRplus无法判读。可与比例法药物敏感性试验进行对比的标本为52例。2.利福平耐药性的结果。以比例法药敏结果为判断标准，使用GenoType MTBDRpuls检测利福平耐药性的敏感度为75％，特异度为97.9％，阳性预测值为75％，阴性预测值为97.9％，总一致率为96.2％。对两种方法进行一致性Kappa检验，K=0.729(P＜0.01)。
　　结论:GenoType MTBDRplus方法检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性，与传统比例法检测比较其敏感度和特异度，具有较高的一致性。但其较传统比例法快速，为临床早期诊断耐药结核病提供快速检测依据，利于临床早期合理治疗。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1．1 对象和方法

1．1．1 标本

1．1．2 试剂和仪器

1．1．3 GenoType MTBDRplus方法对利福平耐药检测

1．1．4 传统比例法检测

1．1．5 统计分析

1．2 结果

1．2．1 55份涂阳痰标本检测情况

1．2．2 利福平耐药性的结果

1．3 讨论

1．3．1 GenoType MTBDRpuls方法检测利福平耐药性的敏感度和特异度结果

1．3．2 GenoType MTBDRpuls方法检测利福平耐药性的优势

1．3．3 实验的不足及可能改进的方法

结论

参考文献

综述 耐药结核病诊断治疗进展

致谢