SND1延缓CCl4诱导的转基因小鼠的肝纤维化进程但促进肝癌的发生及发展

摘要

目的： 多功能蛋白SND1可以影响肝脏代谢、肝癌发生、肝癌血管生成以及肝癌细胞增殖等过程，但其在肝纤维化过程中发挥的作用仍不得而知。本课题主要旨在探讨SND1蛋白在肝纤维化的发生和发展中所起的作用，以及相关的分子机制，次要在于探究同一种蛋白在肝病不同病变阶段及肝脏不同细胞成分中的作用差异。 方法： 首先，通过生物信息学的方法对于Oncomine数据库中收录的人正常肝组织、肝纤维化组织、肝癌组织的芯片数据进行分析，分析不同组别肝组织中SND1蛋白的表达差异。利用SND1全身过表达的转基因小鼠，以野生型小鼠作为对照，通过CCl4腹腔注射来诱导肝纤维化模型，从大体观察、形态染色、免疫组化、免疫印迹、血清生化、肝组织胶原含量测定多种角度，评价SND1转基因小鼠与野生型小鼠肝纤维化表型之间的差异。通过密度梯度离心法分离得到小鼠原代肝星状细胞，利用qPCR及免疫荧光检测TG组原代肝星状细胞的过表达状态及肝纤维化相关蛋白及细胞因子与WT组之间的表达差异；通过体外增殖、趋化、细胞表面超微结构的变化来反映WT组与TG组原代HSC活化状态的差异。利用qPCR及荧光共聚焦显微镜观察CTGF上游Hippo通路的转录复合物元件YAP、TAZ的表达情况以及WT/TG组间细胞内定位差异。延长造模时间后观察WT/TG组肝癌发生之间的差异、肝癌内细胞组分与正常对照及癌旁组织的差异、肝癌及癌旁组织内部SND1表达的差异，观察经历不同的造模时间后，肝组织SND1表达的差异。 结果： 1.Oncomine数据库的临床样本，SND1的表达水平与肝纤维化呈负相关，与肝癌呈正相关； 2.给予CCl4腹腔注射后，全身过表达SND1的转基因小鼠与WT对照组相比，肝组织内的纤维化面积更小、胶原含量更少、肝星状细胞活化的标志蛋白表达更低、转氨酶水平下降； 3.相同造模条件下，TG组原代肝星状细胞的增殖、趋化、分泌细胞因子及细胞外基质蛋白的能力弱于WT对照，HSC活化标志蛋白α-SMA表达下降，细胞表面超微结构更“松垮”，倾向于停留在静息的“星状”表型； 4.小鼠原代HSC中过表达的SND1可以使Hippo通路的YAP/TAZ蛋白倾向于定位在细胞浆中，抑制下游基因CTGF的表达； 5.随着CCl4造模时间的延长，TG组肝细胞中的SND1过表达水平逐渐减弱，直至与WT对照没有明显差别，肝星状细胞的SND1过表达水平不受CCl4造模的影响； 6.SND1全身过表达的转基因小鼠在长时间CCl4刺激后会被诱导产生肝癌，癌组织内肝细胞SND1表达水平升高，Kupffer细胞群体数量增多。 结论： 1.SND1可以延缓肝纤维化的发生发展及肝星状细胞的活化； 2.SND1可能通过改变肝脏免疫微环境诱导肝癌发生，肝细胞癌变后SND1表达升高。

目录

第一个书签之前