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前言
第一章文献综述
1.1植物细胞培养的工程化
1.1.1植物细胞大规模培养的现状
1.1.2植物细胞培养的工程科学问题
1.2鼓泡塔生物反应器中细胞对微环境的响应
1.2.1植物细胞培养的生物反应器
1.2.2鼓泡塔生物反应器的特点
1.2.3鼓泡塔内流体力学研究
1.2.4鼓泡塔反应器内细胞-气泡相互作用
1.2.5鼓泡塔反应器内细胞损伤及其保护机理
1.3植物细胞对机械胁迫的生理应答
1.3.1活性氧与机械胁迫
1.3.2一氧化氮与机械胁迫
1.3.3基因表达与机械胁迫
1.4脂质组学研究
1.5本论文的研究意义和主要研究内容
第二章激光多普勒测速方法对鼓泡塔反应器内的流体湍动剪切力的研究
2.1引言
2.2实验材料与方法
2.2.1培养基密度与粘度测定
2.2.2鼓泡塔生物反应器实验装置
2.2.3激光多普勒测速(LDA)实验装置
2.2.4测量节点选取
2.3流体剪切理论
2.4结果与讨论
2.4.1液相速度随时间的波动
2.4.2测量结果的坐标转换
2.4.3雷诺应力(Reynolds stress)的计算
2.4.4不同截面雷诺应力场的分布
2.4.5不同鼓泡孔径反应器内雷诺应力场的分布
2.5小结
第三章鼓泡对反应器内东北红豆杉细胞生长的影响
3.1引言
3.2实验材料与方法
3.2.1主要试剂与药品
3.2.2主要仪器设备
3.2.3细胞株系及其培养
3.2.4生物反应器装置
3.2.5体积氧传递系数KLa的测定
3.2.6细胞生物量的测定
3.2.7胞外蔗糖含量的测定
3.2.8胞外可溶性磷含量的测定
3.2.9细胞活力的测定
3.2.10细胞膜通透性的测定
3.3结果与讨论
3.3.1不同鼓泡孔径对体积氧传递系数KLa的影响
3.3.2不同鼓泡孔径对红豆杉细胞生长的影响
3.3.3培养体积对红豆杉细胞生长的影响
3.3.4 PF-68对红豆杉细胞损伤的保护
3.4小结
第四章RT-PCR研究鼓泡塔反应器中紫杉醇合成途径相关基因的转录水平
4.1引言
4.2实验材料和方法
4.2.1主要试剂与药品
4.2.2主要仪器设备
4.2.3细胞株系及其培养
4.2.4生物反应器装置
4.2.5总RNA提取
4.2.6引物设计
4.2.7普通RT-PCR及产物测序
4.2.8第一链cDNA合成
4.2.9实时荧光PCR
4.2.10 mRNA的相对定量
4.2.11琼脂糖凝胶电泳
4.2.12细胞线粒体活性的测定
4.3结果与讨论
4.3.1 HMGR基因的cDNA克隆及分析
4.3.2 RT-PCR产物分析
4.3.3反应器培养与摇瓶培养下红豆杉细胞基因表达水平差异
4.3.4不同鼓泡孔径的反应器内基因表达水平
4.4小结
第五章鼓泡塔反应器中细胞活性氧、PAL酶以及LOX酶的研究
5.1引言
5.2实验材料与方法
5.2.1主要试剂与药品
5.2.2主要仪器设备
5.2.3细胞株系及其培养
5.2.4生物反应器装置
5.2.5蛋白含量的测定
5.2.6活性氧(ROS)含量测定
5.2.7 NO含量测定
5.2.8 PAL酶活的测定
5.2.9 LOX酶活的测定
5.3结果与讨论
5.3.1鼓泡塔反应器内机械胁迫下活性氧(ROS)的产生
5.3.2鼓泡塔反应器内机械胁迫下一氧化氮(NO)的产生
5.3.3鼓泡塔反应器内机械胁迫下PAL酶活的变化
5.3.4鼓泡塔反应器内机械胁迫下LOX酶活的变化
5.4小结
第六章鼓泡塔反应器培养与摇瓶培养的细胞磷脂代谢差异
6.1引言
6.2实验材料与方法
6.2.1主要试剂与药品
6.2.2主要仪器设备
6.2.3细胞株系及其培养
6.2.4生物反应器装置
6.2.5 HPLC/ESI-MS条件
6.2.6红豆杉细胞磷脂的提取
6.2.7多元统计分析
6.3结果与讨论
6.3.1东北红豆杉细胞的磷脂图谱
6.3.2反应器培养与摇瓶培养的细胞磷脂差异分析
6.3.3磷脂信号分子与其他信号分子的相互关系
6.4小结
第七章结论与展望
7.1结论
7.2展望
参考文献
发表论文和科研情况说明
附录一Visual basic程序
致 谢