条斑紫菜藻红蛋白的提取纯化及其稳定性研究

摘要

该文探讨了从条斑紫菜叶状体中提取纯化藻红蛋白的方法并对藻红蛋白稳定性进行了研究和分析.分别采用冻融法、化学试剂法、溶胀法、低浓度氯化钙溶液提取法、组织捣碎法、液氮研磨法等多种细胞破碎方法及组合细胞破碎方法对条斑紫菜细胞进行破碎,比较提取效果.应用层析技术除盐进而得到高纯的藻红蛋白.采用Sephadex G-25除盐并使纯度提高至2.970.经一次羟基磷灰石(HA)柱层析,纯度已达4.545,符合藻红蛋白纯度认可标准(4.0).再经一次HA柱层析,即可得到高纯的R-藻红蛋白(纯度为9.909).两次HA柱层析后的R-PE在聚丙烯酰胺凝胶电泳时均得到一条带,表明纯度已经较高.R-PE的最大吸收峰在565nm,其室温荧光发射峰为580nm.通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),R-PE可分为α,β两个亚基,分子量分别为17.0kD和19.0kD.该文得到的条斑紫菜藻红蛋白提纯工艺经济高效,适合大规模生产.对影响条斑紫菜藻红蛋白粗提液稳定性的诸多因素进行了初步研究和探讨.采用了可见光、紫外光、红外光等光源对条斑紫菜藻红蛋白盐析液进行了不同时间照射,检测了吸收光谱的变化,并对变性机制进行了探讨,结果表明,不同光源对藻红蛋白产生不同程度的破坏,照射时间越长,破坏程度越大.同时对影响藻红蛋白稳定性的其它因素也进行了研究,结果表明温度、pH值对藻红蛋白的稳定性有很大影响,藻红蛋白在叠氮化钠溶液中可以保存较长时间.根据上述研究结果,藻红蛋白适宜保存条件为:低温(5℃左右)、避光、一定pH值范围(5-8),加入保护剂(如叠氮化钠溶液)可以更好地保存藻红蛋白.

目录

引言

第一章条斑紫菜藻红蛋白的提取与纯化研究

第一节条斑紫菜藻红蛋白的提取研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第二节条斑紫菜藻红蛋白的纯化研究

1材料和方法

2结果

3讨论

第二章条斑紫菜藻红蛋白稳定性研究

第一节不同光源照射对条斑紫菜藻红蛋白稳定性影响研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第二节其它因子对条斑紫菜藻红蛋白稳定性影响研究

1材料与方法

2结果与讨论

结论

参考文献

致谢