自拟中药复方对小鼠大肠杆菌感染的预防作用研究

摘要

目的:为探讨自拟中药复方对动物机体的免疫调节及预防感染疾病的作用机理，试验研究了预防用自拟中药复方对感染大肠杆菌小鼠血液生理指标、免疫器官病理变化及其指数、血清中Th17及Treg型细胞因子以及TLR4信号通路关键信号分子的影响。
　　方法:(1)选取6只健康小鼠为对照组（记为-72h），另选取252只精神、体况接近的小鼠，按照性别、体重分为6组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为中药复方组，灌胃剂量（相当于生药含量，按0.1 mL/10g灌胃）分别为:20g/kg、10g/kg、5g/kg;Ⅳ组为药物对照组，按66mg/kg灌胃黄芪多糖，Ⅴ组为模型组及Ⅵ组为健康对照组灌胃同体积蒸馏水，均1次/d，连用3d。试验第4d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组小鼠均腹腔注射1.7×108CFU/mL大肠杆菌液（0.1 mL/只），Ⅵ组小鼠注射等量生理盐水。(2)在感染0h、3h、6h、12h、24h、48h、1w，每组分别选取6只小鼠处死获取全血及血清样本，采集小鼠-72h、0h、12h、1w的胸腺、脾脏备用。(3)用全自动动物血液细胞分析仪检测小鼠血液生理指标;用ELISA方法测量血清中IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β、TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB、P38、JNK、ERK、IRF3、TNF-α、IFN-β的含量。(4)称取小鼠-72h、0h、1w的胸腺、脾脏及体质量，计算脏器指数，制作-72h、0h、12h、1w的胸腺、脾脏病理切片。
　　结果:(1)用药3日后，各中药复方组小鼠的WBC、LYM及LYM％均显著高于模型组及对照组(P＜0.05）;感染3h～24h，中药复方组小鼠的WBC、LYM、MID，在3h～12h的RBC、HGB均显著高于模型组（P＜0.05）。(2)用药3日后，中药复方组小鼠血清IL-17、IL-23，高剂量组的IL-10，中、低剂量组的IL-17/IL-10均显著高于模型组及对照组（P＜0.05）;在感染3h复方中药组的IL-10均显著低于感染组(P＜0.05)，IL-17/IL-10比值均极显著高于感染组(P＜0.01)，高、中剂量组的IL-17均高于感染组（P＞0.05），IL-23、TGF-β均低于模型组（P＞0.05）。(3)用药3日后，小鼠血清JNK、NF-κB及TNF-α显著高于模型组及空白对照组(P＜0.05)，P38及IL-6显著低于模型组及空白对照组(P＜0.05)，高剂量组TRIF、IFN-β极显著高于模型组及空白对照组(P＜0.01);与模型组相比，中药复方组血清TLR4在感染期间均显著降低(P＜0.05)，MyD88在6h后显著降低（P＜0.05），NF-κB在6h～12h极显著降低(P＜0.01)，P38、JNK在感染期间均显著降低（P＜0.05），高剂量、低剂量组ERK在感染期间均显著降低（P＜0.05），细胞因子TNF-α、IL-6在3h极显著降低(P＜0.01)，IFN-β无明显变化（P＞0.05）。(4)用药3日后，中药复方中剂量、低剂量组小鼠的脾质量、胸腺质量及其指数均显著高于模型组及对照组(P＜0.05)，在1w时，中药复方组体质量、脾质量、胸腺质量及其系数均显著高于感染组(P＜0.05)，脾脏病理组织形态受损程度较小。
　　结论:(1)通过向小鼠腹腔注射1.7×108CFU/mL大肠杆菌液(0.1 mL/只)，可成功复制小鼠感染模型。(2)预防用自拟中药复方能明显改善小鼠血液生理指标并提高感染大肠杆菌小鼠的外周血的RBC、HGB、WBC、LYM及MID，从而提高小鼠对大肠杆菌的抗感染能力。(3)预防用自拟中药复方通过影响感染小鼠血清IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β等细胞因子的分泌，调节Th17及Treg细胞亚群平衡，调节机体免疫力。(4)预防用自拟中药复方通过减缓感染大肠杆菌引起小鼠血清TLR4信号通路中NF-κB、JNK、P38、ERK及IL-6的升高，减少机体炎症反应，实现对机体的保护作用。(5)预防用自拟中药复方具有促进小鼠胸腺、脾脏的生长，促进感染大肠杆菌小鼠脾脏恢复的作用。

目录

论文说明

英文缩写及中英文对照

声明

摘要

第一节 研究背景

1 中药对机体免疫功能的影响

1．1 中药对免疫器官的影响

1．2 中药对外周血细胞的影响

2 Th淋巴细胞亚群及其分泌细胞因子

3 Toll样受体4信号通路

3．1 MyD88依赖信号转导通路

3．2 MyD88非依赖信号转导通路

4 中药免疫增强剂的研究与应用

第二节 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血液生理指标的影响

1 材料和方法

1．1 试验药物及制备

1．2 试验菌株及菌液配制

1．3 试验动物

1．4 主要试剂和仪器

1．5 试验动物分组与处理

1．6 检测指标及方法

1．7 数据处理

2 结果

2．1 各组小鼠腹腔注射大肠杆菌前后的临床症状

2．2 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血液生理指标的影响

3 讨论

3．1 成功复制小鼠大肠杆菌感染模型

3．2 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血液生理指标的影响

4 小结

第三节 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清Th17、Treg型细胞因子的影响

1 材料与方法

1．1 试验药物及制备

1．2 试验菌株及菌液配制

1．3 试验动物及分组

1．4 主要仪器和试剂

1．5 样本采集及检测

1．6 数据处理

2 结果

2．1 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清Th17型细胞因子的影响

2．2 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清Treg型细胞因子的影响

2．3 中药复方及黄芪多糖对腹腔注射大肠杆菌小鼠IL-17／IL-10比值的影响

3 讨论

3．1 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清IL-17、IL-23的影响

3．2 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清TGF-β、IL-10的影响

3．3 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠Th17／Treg型细胞因子平衡的影响

4 小结

第四节 自拟中药复方对感染大肠杆菌小鼠血清中TLR4信号通路中关键炎症信号分子及细胞因子的影响

1 材料与方法

1．1 试验药物及制备

1．2 试验菌株及菌液配制

1．3 试验动物分组及处理

1．4 主要仪器和试剂

1．5 检测指标及方法

1．6 数据处理

2 结果

2．1 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清TLR4、MyD88、TRIF的影响

2．2 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清中MyD88依赖途径及非依赖途径中炎症信号分子的影响

2．3 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清TNF-α、IL-6、IFN-β的影响

3 讨论

3．1 腹腔注射大肠杆菌对小鼠血清中TLR4介导的MyD88依赖途径、非依赖途径中关键炎症信号分子，及下游细胞因子IL-6、TNF-α、IFN-β的影响

3．2 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清TLR4介导的MyD88依赖途径、非依赖途径中关键炎症信号分子，及下游细胞因子IL-6、TNF-α、IFN-β的影响

4 小结

第五节 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠体质量及胸腺、脾脏的影响

1 材料与方法

1．1 试验药物及制备

1．2 试验菌株及菌液配制

1．3 试验动物分组及处理

1．4 主要仪器和试剂

1．5 检测指标及方法

1．6 数据处理

2 结果

2．1 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠体质量、脾脏和胸腺质量及其指数的影响

2．2 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠脾脏和胸腺病理组织的影响

3 讨论

3．1 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠体质量、脾脏和胸腺质量及其指数的影响

3．2 自拟中药复方对腹腔注射大肠杆菌小鼠脾脏和胸腺病理组织的影响

4 小结

第六节 结论

参考文献

致谢

期间发表的论文