PPARγ在鹅卵巢颗粒细胞脂质代谢中的功能研究

摘要

鹅产蛋时所处的饲养环境和方式，会在一定程度上影响鹅的产蛋性。同时，卵泡的发育与激素的水平，也能调控鹅的产蛋性。而鹅产蛋的数量被决定的最直接的因素，必然是卵泡的发育。颗粒细胞不断的增殖继而凋亡，卵泡类的固醇激素，其中含量的变化，均伴随着卵泡的发育。脂质代谢的调控因素如下，它由脂肪酸的从头合成，脂肪酸β氧化与甘油三酯进行合成和分解一起构成，其中PPARγ在脂质代谢中发挥重要的作用，在脂肪细胞中高水平表达，具有极强的生脂作用，是调控脂质沉积的重要因子。本试验通过基因克隆获得PPARγ基因CDS区序列和启动子序列，并应用实时荧光定量技术检测不同发育阶段卵泡膜层和颗粒层中PPARγ的表达量，同时在体外培养的鹅颗粒细胞中分别转染PPARγ的过表达载体、PPARγ干扰载体，检测脂质代谢、胆固醇合成等相关途径的关键基因表达量变化，以探究PPARγ在鹅卵巢颗粒细胞脂质代谢中的功能。以下是它得到的大体研究成果。
　　(1)克隆获得鹅PPARγ基因CDS区序列1428bp，启动子序列2795bp。鹅PPARγ基因与其他鸟类相似性为第一高，都处于98％以上，符合物种遗传进化规律;PPARγ启动子具有4个核心启动子区，具有多个转录因子结合位点。
　　(2)在鹅等级前卵泡中，PPARγ在膜层中的表达量高于同时期颗粒层;在鹅等级卵泡中，F5阶段卵泡颗粒层PPARγ表达量最高;除F1阶段卵泡中膜层PPARγ表达量高于颗粒层外，F5～F2阶段卵泡中颗粒层中PPARγ的表达量均高于同时期膜层。
　　(3)干扰PPARγ基因表达后，颗粒细胞中FAS基因表达量上升但不显著(P＞0.05)，ACC基因的表达量显著上升(P＜0.05);ApoB与CPT-1基因表达量降低但不显著(P＞0.05)，SREBP1、DGAT-1、DGAT-2基因的表达量显著上升(P＜0.05);CCND2基因表达量显著降低(P＜0.05)，STAR、SREBP2基因的表达量上升但不显著(P＞0.05)。
　　(4)过表达PPARγ基因后，颗粒细胞中ApoB基因表达量上升但不显著(P＞0.05)，CPT-1基因表达量显著上升(P＜0.05)，FAS基因表达量下降但不显著(P＞0.05)，发生显著下降的是ACC基因，其表达量(P＜0.05)，DGAT2基因表达量极显著下降(P＜0.01)，SREBP2基因表达量下降但不显著(P＞0.05)，CCND2基因的表达量显著上升(P＜0.05)，STAR基因的表达量显著下降(P＜0.01)，BCL2基因表达量显著下降(P＜0.01)。

目录

声明

摘要

常用词语英文缩写

1 文献综述

1．1．2 PPARs基因家族成员间功能分歧

1．2 PPARγ简介

1．2．2 PPARγ基因的启动子

1．3禽类卵泡结构与脂质

1．4 PPARγ与脂质沉积

1．4．1脂质沉积相关基因

1．4．2 PPARγ调控脂质的沉积

1．4．3类固醇合成与细胞增殖凋亡

1．5研究的目的和意义

2材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1试验动物与样品采集

2．1．2主要仪器设备

2．1．2主要试剂

2．1．3主要生物学软件

2．2试验方法

2．2．1 PPARγ基因全长cDNA的克隆

2．2．2鹅PPARγ基因启动子区域结构

2．2．3 PPARγ组织表达

2．2．4 PPARγ过表达载体的构建以PPARγ干扰载体的构建

2．2．5 PPARγ过表达载体和干扰载体的扩繁、质粒提取

2．2．6鹅卵巢颗粒细胞原代培养

2．2．7 PPARγ过表达载体和干扰载体转染鹅颗粒细胞

3结果与分析

3．1 鹅卵巢总RNA提取结果

3．2鹅PPARγ基因CDS区克隆

3．3．2 PPARγ的分子进化树分析

3．3．3鹅PPARγ功能预测

3．3．4鹅PPARγ潜在磷酸化位点

3．4．1 鹅PPARγ启动子核心转录区域预测

3．4．2转录因子调控元件结合位点预测

3．6 PPARγ在鹅卵巢颗粒细胞中表达

3．7PPARγ干扰载体转染鹅颗粒细胞

3．7．1转染效果鉴定

3．7．3干扰PPARγ对鹅颗粒细胞类固醇合成、细胞增殖凋亡相关靶基因的影响

3．8 PPARγ过表达载体转染鹅颗粒细胞

3．8．1转染效果鉴定

3．8．2过表达PPARγ对鹅颗粒细胞脂质沉积相关靶基因的影响

3．8．3过表达PPARγ对鹅颗粒细胞类固醇合成、细胞增殖凋亡相关靶基因的影响

4讨论

4．3鹅PPARγ基因核心启动子区

4．4 PPARγ基因对脂质沉积相关靶基因的调控

4．5 PPARγ基因对类固醇合成、细胞增殖凋亡相关靶基因的调控

5结论

参考文献

致谢