枯草芽孢杆菌6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的纯化及部分性质研究

摘要

在对枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6-PGADase,E.C.1.1.1.44)分离纯化的基础上,对其性质进行了初步的研究.动力学研究表明,NADP<'+>是该酶的唯一辅酶.两种底物与酶的结合互不影响,而在产物抑制效果上,5-磷酸核酮糖只竞争性抑制6-磷酸葡萄糖酸,NADPH只竞争性抑制NADP<'+>,所以该酶催化机理是Haldance-Laidler-Socquet随机机理.

目录

前 言

1材料、试剂与仪器

1.1材料

1.1.1实验菌株

1.1.2液体培养基配方

1.2生化试剂

1.3仪器

2方法

2.1 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的纯化及测定

2.1.1超声波破壁和(NH4)2SO4盐析

2.1.2 DEAE-sepharose阴离子交换层析

2.1.3 Blue-sepharose CL-6B特异结合层析

2.1.4 Sephadex G-200凝胶过滤层析

2.1.5 6-PGADase活力测定

2.1.6蛋白质浓度测定

2.1.7纯度鉴定

2.2 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的性质

2.2.1亚基分子量测定

2.2.2表观分子量测定

2.2.3等电点的测定

2.2.4氨基酸组成分析

2.2.5圆二色谱(CD)分析

2.2.6 pH值对酶活力的影响

2.2.7温度对酶活力的影响

2.2.8 6-PGADase米氏常数Km1(NADP+)和Km2(6-GPA)的测定

2.2.9几种盐对6-PGADase活力的影响

2.2.10 6-PGADase的化学修饰

2.2.116-PGADase的催化曲线

2.2.12两种底物与酶结合相互关系

2.2.13辅酶专一性研究

2.2.14产物抑制研究

3结果

3.1 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的纯化结果

3.2 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的性质

3.2.1 亚基相对分子量

3.2.2 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶表观分子量

3.2.3 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶等电点

3.2.4 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶氨基酸组成

3.2.5 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶圆二色谱(CD)分析结果

3.2.6 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的最适pH值

3.2.7 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的最适温度

3.2.8米氏常数Km1(NADP+)和Km2(6-GPA)的测定

3.2.9部分离子对酶活力的影响

3.2.10部分修饰剂对酶活力的影响

3.2.11 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的催化曲线

3.2.12辅酶专一性研究

3.2.13两种底物与酶结合的相互关系

3.2.14产物抑制研究

4讨论

参考文献

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶和磷酸戊糖途径的研究进展

一.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的发现

二.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶在葡萄糖进入EMP和HMP中的调节作用

三.对结合到6-磷酸葡萄糖酸脱氢上辅酶的荧光研究

四.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的变异酶性质

五.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶蛋白质组研究

六.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶晶体衍射研究

七.6-PGADase催化同构类似底物脱氢的研究

八.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的催化机制研究

九.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的医学和生物学意义

Reference

致 谢

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