水稻（Oryza sativa L.）RSS58基因的启动子克隆及RSSG8基因结构的初步研究

摘要

水稻具有重要的经济价值，是植物发育与分子生物学研究的模式植物。随着水稻基因组计划的完成，水稻发育的研究已逐步深入到分子水平。而精细胞作为雄配子在水稻双受精过程中占据着非常重要的地位。来源于同一个花粉的一对精细胞经花粉管传递进入胚囊中，一个与卵细胞融合产生合子，最终发育成胚，另一个与中央细胞融合发育成胚乳。因此，深入研究水稻精细胞发育相关基因的表达具有重要的理论意义和应用价值。RSSG8基因和RSSG58基因就是本实验室从水稻(Oryza sativaL.)精细胞cDNA文库中差减得到的两条精细胞优势表达基因。 本研究利用RSSG58基因cDNA全序列与NCBI中的粳稻基因组文库进行比对、定位；结合生物信息学方法分析预测基因上游的启动子序列。在此基础上设计引物，以粳稻日本晴Oryza sativa (japonica cultivar-group)黄化苗总DNA为模板采用DNA聚合酶链式反应(PCR)的方法扩增出基因上游1093 bp和462 bp两个不同长度的启动子缺失片段(分别命名为JP58B和JP58S)，测序结果显示其具有大多数高等植物启动子的保守元件。进一步构建该启动子片段的植物表达载体pBI121-JP58B和pBI121-JP58S，瞬时表达结果显示两个启动子片段对报告基因GUS均具有较强的启动活性

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论文说明：图表目录

第一章水稻RSSG58基因启动子的克隆及功能鉴定

摘要

1引言

2材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

3结果

3.1 RSSG58基因上游启动序列的生物信息学预测

3.2启动子片段JP58B和JP58S的克隆及其序列分析

3.3 RSSG58基因cDNA及其启动子序列的基因组定位

3.4植物表达载体pB1121-JP58B和pB1121-JP58S的构建

3.5瞬时表达法鉴定启动子片段JP58B和JP58S的启动活性

4讨论

第二章水稻RSSG8基因结构的生物信息学初步分析

摘要

1引言

2 RSSG8基因cDNA及推测蛋白全序列

3 RSSG8基因cDNA核酸序列分析

3.1酶切位点分析

3.2RSSG8基因定位分析

4RSSG8基因推测蛋白序列的生物信息学分析

4.1氨基酸组成分析

4.2疏水性预测

4.3跨膜区分析

4.4可溶性预测

4.5二级结构预测

4.6模体及结构域预测

4.7三级结构预测

5结论

第三章水稻RSSG8基因的原核表达

摘要

1引言

2材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

3结果

3.1RSSG8基因编码区的克隆

3.2表达载体pQE30-RSSG8的构建与酶切鉴定

3.3重组蛋白在大肠杆菌中的表达

4讨论

5小结

参考文献

文献综述 被子植物精细胞发育研究进展

1被子植物双受精概述

2精细胞的结构与功能

2.1被子植物雄性生殖单位的结构

2.2精细胞的显微观察

2.3精细胞的异型性和偏向受精

2.4双受精时的信号传导

3精细胞的分离、纯化与生活力测定

3.1精细胞的分离

3.2精细胞的纯化

3.3精细胞的生活力测定与保存

4被子植物精细胞中的基因表达

4.1差异表达基因克隆技术的应用

4.2植物精细胞中特异表达基因

4.3生殖发育特异启动子对基因表达的调控

5精细胞在植物生殖工程中的应用

6结语

参考文献

在读期间发表论文

致谢

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