诸葛菜与番茄未成熟花粉离体成熟培养及番茄花粉蛋白质检测的初步研究

摘要

诸葛菜(C'orychophramus Violaceua.L.O.E.Schulz)属十字花科(Cruciferae)芸薹族诸葛菜属的一年生或两年生野生草本植物。诸葛菜的农艺性状良好，生长周期短，生物量大；种子含油量高，营养丰富，品质优异；菜苔氨基酸含量高，口感好；是一种优质的油料资源植物，具有很大的开发价值。同时，诸葛菜作为良好的植物遗传材料，已引起了众多遗传学家的关注，其基础研究也取得了较大的进展。 番茄(Lycopersicon esculentum Mill)系茄科番茄属一年生或多年生草本植物。番茄作为重要的蔬菜和水果，它适应范围广，产量高省养丰富，用途广泛。为了进一步了解番茄的雄配子体发育过程，本论文对番茄花粉进行了组织培养和分子生物学两方面的研究：对番茄未成熟花粉进行离体成熟培养；同时对不同时期番茄花粉的蛋白质表达进行了初步的研究。 1．首先对自然条件下生长的诸葛菜小孢子的发育过程进行观测，得到了小孢子发育时间，小孢子发育阶段与花苞长度的关系。 诸葛菜处于双核早期的未成熟花粉在人工离体培养条件下，发育成了充满淀粉粒的成熟花粉，并能萌发长出花粉管。双核早期未成熟花粉的培养成熟率为11.8％；萌发率为2.4％。 2．对番茄小孢子的发育过程进行自然观测。在天气晴朗的盛花期，活体条件下，番茄花苞内的四分体经历l～2d时问发育形成单核小孢子，再经3～5d发育为二核花粉。从四分体的花苞到开花总共需要7～11d。番茄开花后2～3d，花粉粒开始萌发出花粉管，第四天花被脱落，子房膨大成小番茄。四分体花粉直径为11.3～11.5μm；单核期花粉直径为11.5～17.9μm，单核早期花粉细胞的核位于细胞中央，到了晚期核逐渐移到细胞边缘；双核期花粉直径为18.1～23.4μm，双核早期花粉生殖核圆形，而且淀粉粒丰富，到了后期，核逐渐变为纺锤形。在无菌条件下，对番茄未成熟花粉进行分离并培养，结果表明在人工离体培养条件下，花粉在B3培养基即BK盐＋white’s Vitamins＋椰子汁2％＋20％蔗糖中花粉活性最高，在离体培养第九天还能达到43.9％，并能在此培养基卜经7～9d后发育成熟并萌发出花粉管，萌发频率达到1％。番茄成熟花粉即花冠刚刚打开的番茄花粉进行离体萌发，结果表明，适合番茄成熟花粉离体萌发的液体培养基为D即20％蔗糖＋0.07％ca(N0<,3>)<,2>＋10mg/VB<,1>＋150mg/L H<,3>BO<,3>。在此萌发培养基上，番茄成熟花粉的萌发率达到69.0％。 3．本文同时还对不同发育时期的花粉蛋白做了初步的研究。利用不同发育时期花粉的蛋白粗提液做SDS-PAGE电泳分析，由电泳图谱看出：番茄花粉在单核期出现了分子量为21.2kD，26.0kD，33.4kD，69.1kD和97.1kD的五种特异蛋白，双核期出现了分子量为11.7 kD，16.9 kD，37.3kD，41.2kD和47.1kD的五种特异蛋白，萌发花粉管后出现了分子量为20.5kD，82.SkD)和105.3kD三种特异蛋白。即蛋白质格局随着花粉的发育动态变化：单核期和双核期花粉中相对分子量小的蛋白质明显较多，这与此时期花粉生理活动旺盛有关。

目录

第一章诸葛菜未成熟花粉的离体成熟培养摘要

第一章诸葛菜未成熟花粉的离体成熟培养引言

第一章诸葛菜未成熟花粉的离体成熟培养1.材料与方法

第一章诸葛菜未成熟花粉的离体成熟培养2.结果和分析

第一章诸葛菜未成熟花粉的离体成熟培养3.讨论

第一章诸葛菜未成熟花粉的离体成熟培养参考文献

第二章番茄未成熟花粉离体培养摘要

第二章番茄未成熟花粉离体培养1.引言

第二章番茄未成熟花粉离体培养2.材料和方法

第二章番茄未成熟花粉离体培养3结果与分析

第二章番茄未成熟花粉离体培养4.讨论

第二章番茄未成熟花粉离体培养参考文献

第三章番茄不同发育时期花粉蛋白质初步检测摘要

第三章番茄不同发育时期花粉蛋白质初步检测1.引言

第三章番茄不同发育时期花粉蛋白质初步检测2材料和方法

第三章番茄不同发育时期花粉蛋白质初步检测3结果与分析

第三章番茄不同发育时期花粉蛋白质初步检测4讨论

第三章番茄不同发育时期花粉蛋白质初步检测参考文献

文献综述被子植物花粉的离体培养研究进展

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