含ITIM模体的抑制性受体在器官移植免疫调节中的作用

摘要

[目的]：探讨含有免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptortyrosine-based inhibition motif，ITIM)的抑制性受体：细胞毒T淋巴细胞抗原-4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4，CTLA-4，CD152)，B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator，BTLA，CD272)，程序性死亡分子-1(programmed death-1，PD-1，CD279)，白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-1，LAIR-1，CD305)，白细胞相关免疫球蛋白样受体-2(leukocyte-associatedimmunoglobulin-like receptor-2，LAIR-2，CD306)在器官移植免疫调节中的作用。 [方法]：1．建立小鼠颈部心脏异位移植模型(C57/BL6为受者，BalB/C为供者)，按照移植物是否发生排斥反应分为排斥组和对照组，对其脾脏淋巴细胞表面的CD272、CD279进行流式细胞术检测。2．对临床上处于不同免疫状态的移植受者(肾移植急性排斥、肾移植功能延迟恢复、肝移植急性排斥、规律血透/血滤、移植肾功能稳定)血清中的可溶性sCD305、CD306进行ELISA检测。3．对肾移植后并发巨细胞病毒肺炎以及肾移植后恢复顺利(对照组)的患者血清内sCD305、CD306进行ELISA检测。4．对小鼠模型脾淋巴细胞mCD152进行流式细胞术检测(分组同1)，同时对临床上处于不同免疫状态的器官移植受者(分组同2)以及正常人血清内sCD152进行ELISA检测。5．将上述各组结果进行转换并验证满足正态分布后，进行统计学分析。 [结果]：1．小鼠移植模型排斥组CD272阳性率(58.194±8.692)％，CD279为(5.250±5.550)％；对照组CD272阳性率(43.582±7.584)％，CD279阳性率不符合正态分布，波动于(0.390-67.750)％。两组CD272阳性表达率存在显著性差异(P=0.0000)，而CD279无明显差异(P=0.0863)。2．规律血透/血滤组sCD305浓度(0.845-54.415)ng/ml，CD306为(0.000-0.011)ng/ml；移植肾功能稳定组sCD305为(0.000-5.942)ng/ml，CD306为(0.000-0.041)ng/ml；肾移植急性排斥组sCD305为(0.201-50.432)ng/ml，CD306为(0.002-0.045)ng/ml；肝移植急性排斥组sCD305为(0.452-44.906)ng/ml，CD306为(0.000-0.042)ng/ml；移植肾延迟恢复组sCD305为(0.000-6.838)ng/ml，CD306为(0.001-0.085)ng/ml。移植肾功能稳定组sCD305表达水平与规律血透/血滤组、肾移植急性排斥组、肝移植急性排斥组及肾移植延迟恢复组相比，均明显处于较低水平(P＜0.05)；规律血透/血滤组sCD305表达与移植肾功能稳定组、肾移植急性排斥组、肝移植急性排斥组及移植肾延迟恢复组相比均处于较高水平(P＜0.05)；sCD305在其他各组之间的表达无统计学差异(P＞0.1)，而各组的CD306表达无统计学差异(P＞0.05)。3．巨细胞肺炎组与对照组相比，sCD305的表达无统计学差异(P=0.3158)，CD306的表达明显低于对照组(P=0.0002)。4．小鼠移植模型排斥组与对照组淋巴细胞表面CD152的表达阳性率无统计学差异(P=0.4803)。而临床移植肾功能稳定组和移植肾急性排斥组CD152阳性率均低于移植肾延迟恢复组和正常对照组(P＜0.05)。 [结论]：含有ITIM的抑制性受体CD152、CD272、CD279、CD305、CD306在移植免疫中都发挥着重要的作用。CD152、CD279、CD272在T细胞表面表达的时间不同，CD152表达出现的时间较早，CD279最晚。推测它们的表达在T细胞活化后都有变化，且都遵循相似的规律：先升高，然后大量的分子与配体结合，发挥抑制性作用，使表达数量迅速下降，最后再逐步恢复到T细胞活化前的水平。CD305和CD306这两个分子中，真正发挥抑制性作用的是CD305，对sCD305进行检测，可以提示临床移植受者是否正在遭遇不良事件，可以对移植物功能的恢复情况作出预判；CD306的主要功能是通过竞争性结合它们的共同配体，使得CD305与配体结合数目减少，从而间接发挥调节CD305抑制性功能的作用，CD306的检测可以弥补CMV抗原-PP65检测诊断巨细胞肺炎的主观性过强的缺点，将大大增加临床CMV肺炎早期诊断的准确性。推测在机体需要提高免疫应答强度时，CD306通过表达数量的升高，来结合更多的配体，从而减少CD305与配体结合的数量，使CD305对T细胞的抑制作用减弱，提高免疫应答的强度；需要降低免疫应答强度时，会有更多的可溶性的sCD305形成，这些可溶性分子进入循环中，更多地与配体结合，发挥下调免疫反应的作用，而此时CD306则不发挥作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文缩略词表

声明

前 言

第一部分 小鼠颈部异位心脏移植模型的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

附图：小鼠心脏移植

第二部分 小鼠mCD272、mCDC279的检测及其在器官移植免疫调节中的作用

1材料与方法

2结果

3讨论

附表及附图

第三部分：人sCD305、CD306的检测及其在器官移植免疫调节中的作用

1材料与方法

2结果

3讨论

附表及附图

第四部分：人sCD305、CD306与肾移植术后巨细胞病毒肺炎的关系

1材料与方法

2结果

3讨论

第五部分：人sCD152及小鼠mCD152的检测及其在器官移植免疫调节中的作用

1材料与方法

2结果

3讨论

全文总结

参考文献

文献综述

抑制性受体的研究现状

CD305、CD306的研究现状

PD-1/PD-L的研究现状

BTLA的研究现状

参考文献

攻读学位期间发表文章情况

致 谢