白术内酯I对MyD88+卵巢癌细胞的吲哚胺-2,3双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase IDO)的表达及外周血T淋巴细胞增殖活性的影响

摘要

研究目的:
　　研究白术内酯Ⅰ对人MyD88+卵巢癌细胞中吲哚胺-2,3双加氧酶（indoleamine-2,3-dioxygenase IDO）蛋白表达水平的影响。研究人MyD88+卵巢癌细胞与健康人外周血T淋巴细胞共培养后，白术内酯I对T淋巴细胞增殖活性的影响。
　　研究方法:
　　本研究采用Western Blot法：检测白术内酯Ⅰ对MyD88+人卵巢癌细胞中吲哚胺-2,3双加氧酶（indoleamine-2,3-dioxygenase IDO）蛋白表达水平的影响。应用MTT比色法：检测MyD88+卵巢癌细胞与健康人外周血T淋巴细胞共培养后，白术内酯Ⅰ对T淋巴细胞增殖活性的影响。
　　研究结果:
　　1、人 MyD88+卵巢癌细胞株中存在吲哚胺-2,3双加氧酶（indoleamine-2,3-dioxygenase IDO）蛋白的高表达。
　　2、白术内酯Ⅰ能够抑制人MyD88+卵巢癌细胞株IDO的表达。且不同浓度的白术内酯Ⅰ诱导人MyD88+卵巢癌细胞株培养24h、48h后，随着白术内酯Ⅰ药物浓度的增加或药物作用时间的延长抑制IDO蛋白表达水平越明显。
　　3、WesternBlot法结果示：白术内酯Ⅰ药物浓度为10umol/L和白术内酯Ⅰ药物浓度为50umol/L时诱导人MyD88+卵巢癌细胞24h后下调肿瘤细胞内IDO蛋白表达的倍数无明显差异（P>0.05）。
　　4、白术内酯Ⅰ的不同药物浓度诱导人 MyD88+卵巢癌细胞，随着白术内酯Ⅰ药物浓度的升高、作用时间的增加，下调人 MyD88+卵巢癌细胞中IDO蛋白水平表达的倍数在药物诱导48小时、白术内酯 I浓度在100umol/L时最强（P<0.05），有显著性差异。
　　5、不同药物浓度（10umol/L、50umol/L、100umol/L）白术内酯I和不加药分别诱导不同比例的人 MyD88+卵巢癌细胞与正常人外周血 T淋巴细胞共培养72小时后，随着白术内酯Ⅰ药物浓度升高，T淋巴细胞的增殖越明显（P＜0.05）；
　　6、在白术内酯Ⅰ相同的药物浓度下，不同比例的人MyD88+卵巢癌细胞与正常人外周血T淋巴细胞，在比例为S:T=8000个/孔:40000个/孔时，白术内酯Ⅰ药物浓度为100umol/L时，T淋巴细胞的增殖最明显。
　　研究结论:
　　1、人MyD88+卵巢癌细胞中存在IDO蛋白的高表达；
　　2、白术内酯Ⅰ通过抑制TLR4/MyD88信号通路的活性下调人MyD88+卵巢癌细胞中免疫抑制分子 IDO蛋白的表达水平并且呈时间依赖性和药物浓度依赖性；
　　3、白术内酯Ⅰ通过下调与T淋巴细胞相关的免疫抑制分子IDO蛋白的表达，避免了色氨酸的分解和代谢产物犬尿酸的累积，促进了T淋巴细胞的增殖活性，具有药物浓度依赖性。

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缩略词

1、引言

2.1 材料

2.1.1 细胞

2.1.2 实验试剂

2.1.3 主要器材与仪器

2.1.4 主要溶液配制

2.2 方法及技术路线

2.2.1 实验流程图

2.2.2 细胞培养

2.2.3 细胞的处理

2.2.4 药物配制

2.2.5 Western Blot法

2.2.6 MTT法

2.2.7 统计学分析

2.3 结果

2.3.1 Western Blot法

2.3.2 MTT法

2.4 讨论

2.4.1 白术内酯I通过抑制TLR4/MyD88信号通路的活性下调人MyD88+卵巢癌细胞中IDO蛋白的表达水平。

2.4.2白术内酯I下调人MyD88+卵巢癌细胞中与T淋巴细胞相关的免疫分子IDO蛋白的表达水平对免疫系统的影响。

2.4.3 中药白术配方在肿瘤治疗中的作用

2.5 结论

2.6 问题与展望

致谢

参考文献

综述: 吲哚胺2,3-双加氧酶在卵巢恶性肿瘤免疫系统中的研究进展

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