人成体干细胞诱导分化成视网膜感光细胞样细胞的实验研究

摘要

【目的】比较人眼眶脂肪组织来源干细胞与牙周韧带来源干细胞定向分化至视网膜感光细胞样细胞的能力。探索通过组织块培养法从人眼眶脂肪组织原代培养间充质干细胞的方案及技术。比较通过组织块培养法和酶消化法获取的人眼眶脂肪组织来源干细胞向视网膜感光细胞样细胞定向分化的能力。
　　【方法】扩增培养通过酶消化法获取的人眼眶脂肪组织来源干细胞株和牙周韧带来源干细胞细胞株,检测其细胞表面的干细胞标记。然后使用多种培养基对两种不同组织来源的间充质干细胞进行定向诱导,使其向视网膜感光细胞分化,在不同时间点收获细胞,检测视网膜感光细胞特异性基因和蛋白表达。比较这两种细胞向视网膜感光细胞定向分化的能力。继而通过组织块培养法和酶消化法从人眼眶脂肪组织中分离脂肪组织来源干细胞,并通过免疫荧光染色检测其干细胞标记物。对通过不同方法获得的脂肪组织来源干细胞进行培养,诱导其向视网膜感光细胞分化,在不同时间点收获细胞,检测细胞中视网膜感光细胞特异性基因和蛋白表达,比较两种细胞的分化能力。
　　【结果】通过酶消化法获得的人眼眶脂肪组织来源干细胞株和牙周韧带来源干细胞株接受定向诱导分化后,前者表现出类似视网膜感光细胞外段样结构;后者的细胞形态无显著改变。牙周韧带来源干细胞表达Pax6基因早于脂肪组织来源干细胞,但是表达Rhodopsin基因及视紫红质蛋白晚于脂肪组织来源干细胞。本研究成功地通过组织块培养法从人眼眶脂肪组织中原代培养出脂肪组织来源干细胞。通过组织块培养法和酶消化法获取的人眼眶脂肪组织来源干细胞接受诱导分化后,均表现出类似视杆细胞外段样结构。通过组织块培养法获得的细胞较早表达Pax6基因、Rhodopsin基因及视紫红质蛋白。
　　【结论】眼眶脂肪组织来源干细胞与牙周韧带来源干细胞具有定向分化至类似视网膜感光细胞样细胞的潜能,前者的分化能力强于后者。通过组织块培养法可以从人眼眶脂肪组织中原代培养出脂肪组织来源干细胞,该细胞具有定向分化至类似视网膜感光细胞样细胞的潜能,并且分化能力强于通过酶消化法分离获取的细胞。

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英文缩略词表

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前 言

第一部分 脂肪组织来源干细胞与牙周韧带来源干细胞诱导分化至视网膜感光细胞样细胞的比较

第一节 材料和方法

第二节 实验结果

第三节 讨论

第四节 小结

第二部分 通过组织块培养法及酶消化法获取人眼眶脂肪组织来源干细胞并鉴定

第一节 材料和方法

第二节 实验结果

第三节 讨论

第四节 小结

第三部分 不同分离方法获得的ADSC细胞诱导分化至视网膜感光细胞样细胞及鉴定

第一节 材料和方法

第二节 实验结果

第三节 讨论

第四节 小结

结论

参考文献

综述

攻读学位期间发表文章情况

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