水稻高效表达启动子的分离及表达分析和重金属离子锌和铁污染的土壤植物修复研究

摘要

真核生物基因表达调控是分子生物学的研究热点之一。植物基因的表达受启动子的控制，高效表达启动子的分离及功能分析不仅是植物基因工程研究的重要方面，也是表达调控研究的重要内容。 本文根据EST数据克隆了一个预测在水稻茎中高效表达的启动子Os252和两个预测在水稻胚乳中高效表达的启动子Os772及Os359。将这三个启动子与GUS基因构建成表达载体。然后采用农杆菌介导法转化水稻粳稻品种日本晴(O．sativa japonica)，分析这些启动子的组织特异性以及启动基因表达强度。 转基因水稻GUS染色及PCR鉴定结果表明，GUS基因已经成功地整合进水稻基因组中。GUS组织化学分析表明，Os252能启动GUS基因在水稻叶、茎以及胚乳中表达，而Os772和Os359能启动GUS基因在水稻胚乳中表达但不能在叶子和茎中表达。进一步GUS酶活性的测定表明，叶和胚乳中Os252启动子活性分别是35S启动子的1.9和2.5倍，而Os772和Os359启动子在各组织中的酶活性相对较低。由于这些启动子都来自于水稻，具有可靠的安全性。Os252启动子在叶和胚乳中的活性高于35S启动子，因此该启动子可望用于水稻基因工程研究。

目录

声明

第一部分 水稻高效表达启动子的分离及表达分析

摘要

1.前言

1.1水稻简介

1.2启动子一般特点

1.3特异性启动子的应用

2.材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

3.结果与讨论

3.1启动子的克隆及载体构建

3.2根癌农杆菌介导的水稻遗传转化

3.3转基因植株的鉴定和分析

3.4讨论

参考文献

第二部分重金属离子锌和铁污染的土壤植物修复研究

摘要

1.前言

1.1土壤重金属污染概况

1.2植物修复技术

1.3植物修复技术的应用

2.材料与方法

3.结果与讨论

3.1数据库检索和基因序列分析

3.2 ZAT1OE和IRT1OE过量表达载体的构建

3.3根癌农杆菌介导的烟草转化

3.4转基因植株的PCR鉴定

3.5转基因植株的GUS组织化学染色

3.6重金属离子富集实验

3.7转基因植株重金属离子的测定

3.8讨论

参考文献

本研究发表的论文

致 谢