斑蝥素抑制人胰腺癌细胞增殖和诱导其凋亡的实验研究

摘要

研究背景和目的: 斑蝥素(Cantharidin)是传统中药斑蝥中提取的活性成份，已被用于肝癌、胃癌的临床治疗。近年来的许多研究证实，它对多种肿瘤细胞具有较强的杀伤和抑制作用，但至今尚未见其单独作用于胰腺癌的报道。本研究旨在从体内体外两个水平观察斑蝥素是否具有抑制人胰腺癌细胞增殖并诱导其凋亡的作用，初步探讨其可能的作用机制。 方法: 1．斑蝥素抑制人胰腺癌细胞增殖及诱导其凋亡的体外研究部分①应用MTT法检测斑蝥素对胰腺癌细胞株sw1990增殖的影响。 ②采用流式细胞术、电镜、TUNEL法、Hoechst染色的方法检测斑蝥素对sw1990细胞凋亡的影响。 ③提取sw1990细胞RNA和蛋白分别采用RT-PCR, western blot方法检测凋亡相关基因(bcl-2,bax,p53,caspase-3)的表达。 2．斑蝥素抑制裸鼠移植瘤胰腺癌细胞生长的研究部分①检测斑蝥素对裸鼠移植瘤生长的影响。 ②采用组织芯片技术和免疫组化方法，检测凋亡相关蛋白bcl-2,bax,p53,caspase-3的表达。 结果: 1．斑蝥素诱导胰腺癌细胞凋亡的体外研究部分 ① MTT法结果示，斑蝥素在体外明显抑制人胰腺癌sw1990细胞的生长，此效应呈时间和剂量依赖性。 ②斑蝥素作用后，形态学观察发现典型的凋亡细胞，Hoechst 33258荧光强染、TUNEL标记阳性,流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染法显示凋亡细胞比率增高。 ③ RT-PCR和western blot检测可见用药组bax、p53、caspase-3表达上调，而bcl-2的表达明显下调。 2．斑蝥素抑制裸鼠移植瘤胰腺癌细胞生长的研究部分 ①用药组移植瘤体积增长幅度明显小于对照组，用药组移植瘤重量小于对照组，差异具有显著性。 ②免疫组化结果显示用药组p53、caspase-3表达明显上调，而bcl-2/bax的表达明显下调。 结论: 在体外体内两个水平斑蝥素均能抑制胰腺癌细胞株sw1990 的增殖；斑蝥素能诱导胰腺癌细胞凋亡,其作用可能与凋亡调节基因p53、caspase-3 的上调，bcl-2/bax 的下调有关。