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论文说明:符号说明(Abbreviations)
声明
第一章 前言
1.1 Micrococcins
1.2 Thiocillins
1.3 Thiostrepton(硫连丝菌素,TSR)
1.4 Cyclothiazomycin(CLT,环噻唑霉素)
1.5 其他类型的多肽类抗生素合成基因簇研究进展
1.6 吸水链霉菌应城变种(S.hygroscopicus var.Yingchengensis)10-22研究历史
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 质粒
2.1.3 培养基和化学试剂
2.2 实验方法
2.2.1 链霉菌培养及菌种保藏(84)
2.2.2 大肠杆菌质粒质粒DNA的提取(84)
2.2.3 大肠杆菌和链霉菌质粒DNA的少量快速提取及检测(快检)
2.2.4 链霉菌质粒DNA的大量提取(84)
2.2.5 链霉菌总DNA的少量快速提取
2.2.6 DNA片段的回收(维特洁试剂盒)
2.2.7 小量PCR产物的纯化(维特洁试剂盒)
2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.2.9 质粒DNA对大肠杆菌感受态细胞的转化
2.2.10 高压电穿孔法转化大肠杆菌
2.2.11 链霉菌文库的构建(以pHZ1358为载体)
2.2.12 两亲本介导的质粒DNA的跨属接合转移及初步验证(适用于吸水链霉菌和其他链霉菌)
2.2.13 环噻唑霉素的生物学活性测定(抑菌实验)
2.2.14 环噻唑霉素的快速提取
2.2.15 利用HPLC-MS对环噻唑霉素进行检测分析
2.2.16 利用LC-EI-Q-TOF对环噻唑霉素进行高精度质谱检测分析
2.2.17 生物信息学分析
第三章 结果和讨论
3.1 吸水链霉菌10-22中环噻唑霉素生物合成基因簇的克隆
3.2 吸水链霉菌10-22能产生两种不同构象的CLT
3.3 14E6中插入片段的测序以及ORF分析
3.4 用于异源表达的双功能质粒pJTU4891-4894的构建
3.5 一个完整环噻唑霉素基因簇的界定
3.6 CLT来自于前体肽pro-CLT的翻译后修饰
3.7 噻唑啉和噻唑环的形成——选择性脱氢过程
3.8 CLT分子中脱水氨基酸的合成过程
3.9 前导肽LP的切除和三位取代吡啶的合成可能同时发生
3.10 叔碳(α位)硫醚键的生物合成成就了CLT的桥状大环结构
3.11 基因簇中其他编码功能蛋白的基因
3.12 CLT生物合成途径总结
第四章 总结和展望
4.1 环噻唑霉素生物合成研究的工作总结和创新点
4.2 进一步研究工作的展望
第五章 其他课题研究工作总结
5.1 多烯类抗生素合成酶结构域的进化差异分析
5.2 基于结构域同源性比较的新产素链霉菌的筛选
5.3 电压依赖型离子通道基因的克隆和转录分析
参考文献
攻读博士学位期间发表及投稿中的研究论文目录
致 谢