青蒿素衍生物对抗原提呈细胞的促凋亡作用及机制探究

摘要

研究目的：体外探讨青蒿琥酯（ART）对树突状细胞（DC）和单核-巨噬细胞的促凋亡作用及凋亡途径；体内探讨青蒿琥酯对DSS结肠炎小鼠肠粘膜固有层单个核细胞（LPMC）凋亡的影响。
　　内容和方法：（1）体外诱导小鼠骨髓细胞（BMC）向树突状细胞（DC）方向分化以得到大量高纯度DC。培养液中添加LPS和/或ART，收集细胞提取蛋白，Western blot检测凋亡相关蛋白（caspase3，caspase8，caspase9，PARP）的表达水平；流式细胞术检测DC成熟相关的表面标记（CD86、MHCII、CD40、CD80）的表达水平。（2）小鼠腹腔注射1ml3％硫乙醇酸盐培养基，4天后分离腹腔巨噬细胞（MQ）并进行体外培养，培养液中添加LPS和/或ART，收集培养液上清检测肿瘤坏死因子（TNF）-?的表达量；收集细胞提取蛋白，Western blot检测caspase3的表达水平。采用人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1），培养液中添加ART，CCK-8检测细胞数量变化，流式细胞术观察细胞凋亡与否，Western blot检测凋亡相关蛋白（caspase3，caspase8，caspase9，PARP）的表达水平；并加入全caspase抑制剂（z-VAD-fmk），流式细胞术观察细胞凋亡水平的变化。（3）予小鼠3%葡聚糖硫酸钠（DSS）饮水5天以建立结肠炎模型，125 mg/k g/天ART或等量生理盐水连续灌胃10天，第10天处死小鼠，提取肠粘膜固有层单个核细胞（LPMC），流式细胞术检测DC和MQ细胞数量及细胞凋亡比例的变化。
　　结果：（1）对于DC，ART可以激活内源性凋亡途径相关的caspase9，进而激活效应性caspase3，刺激PARP活化，引起细胞凋亡；但是，ART对DC的细胞成熟没有显著影响。（2）对于腹腔MQ，ART降低LPS活化的MQ产生TNF-?的水平，但不能引起caspase3活化。但对于THP-1，ART抑制其细胞增殖；促进其凋亡；主要通过激活内源性凋亡途径相关的caspase9，进而激活效应性caspase3，引起PARP活化，最终引起凋亡，而caspase8并无激活；用全caspase抑制剂z-VAD-fmk作用之后，ART促THP-1细胞凋亡的作用显著降低。（3）对于LPMC，DC和MQ的细胞数量在 DSS模型组比正常对照组显著升高。在DSS结肠炎小鼠中，ART能显著减少DC和MQ的细胞数量、显著促进DC和MQ的细胞凋亡，但对非炎症状态下的DC和MQ的细胞数量和细胞凋亡均没有显著影响。
　　结论：（1）在体外，ART通过内源性凋亡途径引起DC凋亡，但是对DC的成熟没有显著影响；ART显著降低 LPS活化的腹腔 MQ产生 TNF-?，但不引起MQ凋亡；ART可减少THP-1细胞数量，并通过内源性凋亡途径促进THP-1细胞凋亡。（2）在体内，DSS结肠炎LPMC中DC和MQ的细胞数量显著升高；ART能通过显著促进DSS结肠炎小鼠中DC和MQ的细胞凋亡从而显著减少DC和MQ的细胞数量；但对非炎症状态下的DC和MQ的细胞数量和细胞凋亡均没有显著影响。

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英文缩略词表

前言

第一章 青蒿琥酯对DC的作用及机制探究

1 .1引言

1 .2动物和材料

1 .3 实验方法

1 .4 结果

1 .5 讨论

第二章 青蒿琥酯对单核-巨噬细胞的作用及机制探究

引言

第一节 青蒿琥酯对小鼠腹腔来源巨噬细胞的作用及机制探究

第二节 青蒿琥酯对人急性白血病单核细胞系THP-1的作用及机制探究

讨论

第三章 青蒿琥酯对小鼠DSS结肠炎中树突状细胞和巨噬细胞的促凋亡作用

3 .1 引言

3 .2 动物和材料

3 .3 实验方法

3 .4 结果

3 .5 讨论

全文总结

参考文献

致谢

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