IL-6/Stat3通路下调口腔扁平苔藓CD4+CD25+调节性T细胞功能及机制研究

摘要

目的：口腔扁平苔藓（OLP）是一种T细胞介导的自身免疫性疾病，CD4+CD25+调节性T细胞在机体免疫稳态的维持中发挥了重要作用。以往研究证明，OLP患者中该群细胞比例增高，可能参与了疾病的病理进程。IL-6/Stat3可参与下调Treg的功能，且已有研究证实OLP患者中IL-6较正常对照显著增高。本课题试图探索在OLP患者有无调节性T细胞的数量不足或功能缺陷，以及试图探索其功能缺陷可能的机制。
　　方法：1、免疫组织化学技术检测了OLP患者损害部位调节性T细胞的数量变化，流式细胞学技术检测了OLP患者外周血调节性T细胞在CD4+T细胞中的比例变化；2、Real-time PCR方法检测了OLP患者调节性T细胞关键转录因子Foxp3、细胞因子TGF-β、IL-10和IL-35的表达水平，ELISA技术检测了TGF-β、IL-10的血清水平和用流式细胞学技术检测了在疾病炎症环境中调节性T细胞中促炎因子的表达变化；3、用调节性T细胞和效应T细胞共培养的功能实验探索了调节性T细胞对后者的抑制活性的变化，和效应T细胞对调节性T细胞抑制活性的抵制效应；4、分别用ELISA技术、Realtime PCR技术、流式细胞术检测了IL-6-IL-6R-Stat3通路各组员的表达水平，并用IL-6参加的功能实验探索了其对调节性T细胞抑制活性的影响，最后检测了患者的调节性T细胞中Stat3磷酸化对IL-6敏感性的变化。
　　结果：1、OLP患者局部损害的Foxp3+细胞增多，且糜烂型稍多于网纹型。外周血的CD4+CD25+CD127low/-T细胞增多,大约是后者的2倍，且OLP患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞中Foxp3蛋白水平表达强度增高，糜烂型略高于网纹型；2、与蛋白水平一致，Foxp3在mRNA水平也表达增高。TGF-βmRNA在网纹型与糜烂型OLP中都明显低于正常对照组，IL-10、IL-35的两个亚基（EBI3和IL-12A），TGF-β受体的两个亚基（TβRI和TβRII）在mRNA水平都没有显示出明显差异。在血清水平，OLP患者TGF-β浓度明显低于正常对照组，IL-10表达水平亦未发现统计学差异。OLP患者外周血 CD4+Foxp3+T细胞中IL-17+T细胞比例升高，CD4+Foxp3+IFN-γ+T细胞在Treg中的比例在三个实验组中都较低，两两比较无统计学差异；3、OLP患者CD4+CD25+T细胞对效应T细胞的抑制效率与正常对照的比较降低。交叉功能实验未表明OLP患者来源的效应T细胞存在对CD4+CD25+T细胞抑制效应敏感性降低；4、IL-6-IL-6R-Stat3通路上，IL-6在OLP患者外周血的浓度增高，在局部损害的mRNA水平也有上升；OLP来源的CD4+CD25+CD127low/- T细胞的IL-6R水平高于正常对照组；CD4+CD25+T细胞的Stat3 mRNA水平未见明显改变。IL-6能够进一步降低CD4+CD25+T细胞的抑制活性，且OLP患者的Treg的Stat3磷酸化对IL-6更为敏感。
　　结论：OLP患者的Treg在外周和损害部位都有增多，并伴有转录因子Foxp3的表达增强。但是这部分细胞较正常对照是存在缺陷的，表现在TGF-β表达下降和Th17样Treg比例增多。其次，OLP患者的Treg对效应T细胞的抑制活性下降，IL-6可进一步削弱这个活性。可能的机制表现在OLP患者外周和局部高水平的IL-6环境，以及IL-6R在患者Treg表面表达上升，导致患者Treg对IL-6的敏感性增强，通过IL-6-IL-6R-Stat3通路发挥效应。

目录

缩略词

前言

第一部分 OLP患者局部损害及外周血中Treg比例的研究

1. 研究方法

2 结果

3 讨论

第二部分 OLP患者外周血Treg相关细胞因子的表达

1. 研究方法

2. 结果

3. 讨论

第三部分 OLP患者Treg抑制效率的研究

1.研究对象

2.研究方法

3. 结果

4. 讨论

第四部分 IL-6/Stat3通路对OLP患者Treg抑制活性的影响

1. 研究方法

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

在读期间发表的论文或成果

致谢

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