冬虫夏草及虫草制品中活性成分检测方法的建立及含量测定

摘要

虫草(Cordyceps)是一类具有很高的药用价值且资源稀缺的食药用真菌,其在我国主要分布于高寒草甸地区,如西藏、云南等地区。因其在抗癌、抗病毒等方面具有良好功效,被广泛加工制成相关营养、滋补、保健品,常见的类型有制剂、片剂等。由于其生长环境条件严苛,且人工无法栽培天然冬虫夏草,使得其市场售价居高不下,从而导致市场出现假冬虫夏草或以别的物质冒充虫草制品,欺骗消费者使其权益受到侵害。本研究通过考察比较4种虫草样品和3种虫草制品在核苷、虫草酸、麦角甾醇等营养成分的含量上的差异,希望能够对今后全面建立虫草营养价值体系有所帮助,也期待为今后虫草制品在质量控制、规范等方面提供依据。
　　本试验主要研究内容如下:
　　1、运用高效液相色谱(HPLC)对虫草及其制品中虫草素和腺苷的含量进行检测方法研究并制定了农业行业标准。比较提取溶剂、提取方法、提取时间等流动相的不同对虫草及其制品中虫草素和腺苷的提取效率的影响,最终确定其提取方法为:固体试样:称取粉碎均匀的样品0.5 g于100 mL容量瓶中,加水约80mL,置于超声波仪中超声提取3 h,取出后用超纯水定容,摇匀。取1 mL样液离心,将上清液过0.45μm MCM微孔滤膜,滤液供高效液相色谱法分析;液体试样:准确吸取5 g样品于50 mL容量瓶中,加水约40 mL,置于超声波仪中超声提取30 min,取出用超纯水定容摇匀。取样液过0.45μm MCM微孔滤膜,滤液用高效液相色谱法在流速1 mL/min,柱温35℃下进行测定。该方法下腺苷和虫草素均在1-50
　　μg/mL范围内有良好的线性,且回收率在93.5％-99.7%之间,7家实验室对本方法的验证均结果较好,证明了此方法的可行性及可靠性。在此基础上延展出对5类核苷物质的检测方法的确定,同时对稍有变动的麦角甾醇测定方法进行验证。
　　2、采用建立好的方法对3个产地冬虫夏草和北虫草及3种制品中5种核苷类物质及麦角甾醇的含量进行测定,还采用现有方法对样品中虫草酸、15种水解氨基酸和5种金属元素的含量进行研究。结果表明:虫草样品中只在北虫草中测出含有虫草素,其含量为2.404 mg/g,其余三种冬虫夏草中未检出含有虫草素,在虫草片制品中测得含有虫草素34.021 mg/g;北虫草中除虫草素外另4种核苷类成分的总含量最高,达3.96 mg/g,云南产冬虫夏草的含量最低为2.24 mg/g。麦角甾醇的含量在北虫草中含量最高,约为西藏产冬虫夏草2倍、青海产冬虫夏草3倍。西藏冬虫夏草所含虫草酸最多,达到159.886 mg/g,且4者虫草酸含量两两间均差异极显著。4种虫草样品在氨基酸总含量上均为差异显著,其中云南冬虫夏草的氨基酸总量最高,为29.302 g/100g。云南和西藏冬虫夏草中镁(Mg)含量差异不显著,含量为4种虫草样品中最高,分别为1.554mg/g和1.544 mg/g,铜(Cu)的含量在青海冬虫夏草中最高,达到20.127 mg/kg,西藏冬虫夏草含铁含量最多,是
　　791.653 mg/kg,而锌(Zn)和锰(Mn)则在云南冬虫夏草中含量最大,分别为145.589 mg/kg和64.359 mg/kg。虫草菌丝体口服液中未测出含有肌苷、腺嘌呤、虫草素、麦角甾醇、虫草酸和氨基酸成分。仅在虫草片制品中测到含有虫草素,其含量为34.021 mg/g,麦角甾醇在胶囊制品中的含量较虫草片的含量高,达到1.983 mg/g,且胶囊制品中氨基酸总量约为虫草片制品氨基酸总量的2倍,达31.164 g/100g,虫草酸在虫草片制品中的含量比胶囊制品要高,达162.591 mg/g,在所有测定的成分中,口服液的含量均是最低的。
　　3、按国标对所有样品中总砷(As)及铅(Pb)、镉(Cd)的含量进行测定。实验结果表明:重金属铅和镉分别在西藏和云南产冬虫夏草中含量最多,铅在西藏冬虫夏草中含量为211.395μg/kg,镉在云南冬虫夏草中含量为29.008μg/kg,西藏总砷含量最多为4.864 mg/kg,三种有害金属的含量均在北虫草中含量最低。制品中虫草片的铅和镉含量比另外两种制品的含量要高,分别为13.174μg/kg和18.838μg/kg,口服液中未测到有铅存在,且另两种有害金属的含量均为最低。

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引言

1、虫草概述

2、活性成分

3、分离提取方法

4、检测方法

5、虫草产品

6、试验意义

第一章 虫草及其制品中活性成分检测方法的建立

1.1 试验材料

1.2虫草素和腺苷检测方法的确定

1.3 5种核苷类检测方法的确定

1.4 麦角甾醇

1.5 讨论

第二章 虫草及制品中核苷、麦角甾醇等含量的测定

2.1 试验材料

2.2 试验方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

第三章 虫草及制品中有害污染物含量的测定

3.1 试验方法

3.2 试验方法

3.3 结果与分析

3.4 讨论

结论

参考文献

附录

致谢