结肠炎癌变过程中MUC1粘蛋白的变化及苹果多糖对MUC1的影响

摘要

研究目的：MUC1粘蛋白是一种高分子量、高糖基化的跨膜蛋白，在肿瘤组织中异常的高表达，并且与肿瘤的发生、发展和转移过程密切相关。MUC1作为重要的肿瘤生物学标志物，已成为肿瘤靶向治疗的研究热点。本实验拟从苹果渣中提取苹果多糖，以结肠癌细胞系 SW-1116，HT-29以及小鼠结肠炎相关的结肠癌变模型为基础，观察苹果多糖对MUC1的影响及防治结肠炎癌变的作用，研究MUC1在结肠炎癌变过程中的变化，为其作为防治结肠炎癌变潜在的治疗靶点提供理论依据。
　　研究方法：以苹果果渣为原料，采用水提醇沉、酸碱降解、透析和除蛋白法提取苹果多糖（AP）；以DMEM培养液培养人结肠癌细胞株SW-1116，HT-29，分别给予0.5mg/mL、1mg/mL苹果多糖培养24、48h，收集细胞，提取蛋白，用Western-blot方法检测MUC1蛋白水平变化；采用致癌剂氧化偶氮甲烷（AOM）与致炎剂右旋葡聚糖苷钠（DSS）联合应用复制小鼠结肠炎相关的结肠癌模型。将150只五周龄雄性ICR小鼠，随机分为5组：正常对照组、模型组、3个给药组，每组30只。实验开始时正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水，其余各组小鼠腹腔注射10mg/kg的氧化偶氮甲烷AOM。一周后，饮水中添加2.5%（W/V）右旋葡聚糖苷钠（DSS）饮水一周，间隔两周后，再次饮用2.5%（W/V）DSS水溶液一周。第七周时，在给药组小鼠饲料中加入含1.25%、2.5%、5%的苹果多糖，喂养小鼠至实验结束。在实验过程的第3,6,9,15,20周从正常和模型组及治疗组中随机选取处死小鼠，其余各组小鼠均在实验结束的第20周处死，收集小鼠肠道样本，用于HE染色、免疫组化及Western-blot方法检测，观察MUC1的变化及苹果多糖的作用。
　　研究结果：通过对苹果多糖的提取纯化，得到糖含量在87.3%和分子量为50000-100000Da均一的苹果多糖；在细胞实验中，人结肠癌系SW-1116，HT-29细胞在给予苹果多糖后，MUC1粘蛋白的表达在24h、48h均表现为降低趋势，且48h后的MUC1粘蛋白表达明显低于对照组（P＜0.05)；AOM/DSS复制小鼠结肠炎癌变的模型，病理HE染色显示：在第20周时，模型组中全部小鼠肠道发生结肠腺癌和/或结肠腺瘤。给药组在不同程度上控制了结肠肿瘤的发生率，苹果多糖5%剂量组中明显减少肿瘤的发生，表现为苹果多糖对结肠炎发生癌变的防治作用。采用免疫组化、Western-blot方法测定结肠粘膜组织中MUC1的表达变化，在炎症急性期，粘膜组织中MUC1的表达与对照组比无显著性差异，而在炎症持续阶段及肿瘤形成后，MUC1呈现出高表达（P＜0.01），给药组小鼠粘膜中MUC1的表达较模型组比呈现降低的趋势，而苹果多糖5%给药组中小鼠粘膜MUC1的表达水平较模型组比明显降低（P＜0.01）。
　　结论：
　　1.苹果多糖可有效的防治ICR小鼠实验性结肠炎相关的结肠癌变的作用。
　　2.MUC1粘蛋白在结肠炎症持续过程中呈现高表达，在肿瘤形成后其表达量异常增高，提示MUC1粘蛋白的变化与结肠炎癌变过程密切相关。
　　3.苹果多糖可影响MUC1粘蛋白的变化，为苹果多糖防治结肠炎癌变机制提供一定的实验依据。

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引言

正文

第一部分 文献综述

1 炎症性肠病及结/直肠癌的治疗现状

2 MUC1及其与肿瘤的关系

3 MUC1在结直肠癌中的表达

4 MUC1粘蛋白的临床应用

第二部分 苹果多糖对MUC1的影响及MUC1在结肠炎癌变中的变化

1实验材料

2实验方法

3 实验结果

4讨论

结语

参考文献

个人简介和研究成果

致谢