丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶的制备及特异性结合肽的筛选

摘要

NS3丝氨酸蛋白酶参与病毒多聚蛋白的切割和成熟,在病毒生命周期中起关关键作用,是抗病毒药物研究和开发的首选靶标.为了对它进行深入研究,加快蛋白酶抑制剂的开发进程,该研究从蛋白酶的制备着手,建立了简便实用的体外切割系统;制备了特异性鼠单克隆抗体;同时利用噬菌体展示技术筛选到多个能够特异性结合丝氨酸蛋白酶的噬菌体肽.实验分成四部分:1.丝氨酸蛋白酶在昆虫细胞中的表达.2.单链丝氨酸蛋白酶的构建和表达.3.特异性单克隆抗体的制备.4.特异性结合肽的筛选.通过上述一系列研究,我们解决了大量制备高活性丝氨酸蛋白酶纯品的问题;建立了简单实用的体外切割系统;制备了丝氨酸蛋白酶的特异性单克隆抗体;并尝试从噬菌体随机肽库中寻找有潜在功能的丝氨酸蛋白酶特异性结合肽.所获得的实物,包括单链丝氨酸蛋白酶、特异性单抗、特异性结合肽、人多克隆抗体以及体外切割模型为进一步研究HCV丝氨酸蛋白酶以及蛋白酶抑制剂的研制奠定了物质基础.

目录

缩略语

前言

第一部分HCV丝氨酸蛋白酶在昆虫细胞中的表达

1.1材料和方法

1.2实验结果

1.3讨论

第二部分HCV单链丝氨酸蛋白酶的制备与鉴定

2.1材料和方法

2.2实验结果

2.3讨论

第三部分抗HCV NS3N4A单克隆抗体的制备与初步鉴定

3.1材料和方法

3.2实验结果

3.3讨论

第四部分HCV丝氨酸蛋白酶特异性结合肽的筛选

4.1材料和方法

4.2实验结果

4.3讨论

附：HCV核心蛋白在昆虫细胞中的表达研究

5.1材料与方法

5.2实验结果

5.3讨论

总结

致谢

参考文献

文献综述