c-Jun亮氨酸拉链结合蛋白（Jlip）和干扰素诱导的蛋白IFP35及其自身的相互作用研究

摘要

该实验室前期研究揭示,c-Jun亮氨酸拉链结合蛋白(c-Jun leucine zipper interacting protein,Jlip)可以caspase-3依赖的方式调控转录因子激活蛋白-1(AP-1)的活性,同时,Jlip通过与caspase-3形成正反馈环增强肿瘤细胞对肿瘤坏死因子(tunor necrosis factor,TNF)诱导细胞凋亡的敏感性.该文研究结果进一步揭示,Jlip还是caspase-6的底物,切点位于紧邻N端PH结构域下游的D147.切割产生PH和ΔPH两个片段,后者不同于全长Jlip的质膜定位,而是以均匀分布的方式定位于细胞质.为了进一步寻找ΔPH的相互作用蛋白,我们以其为诱铒,通过酵母双杂交筛选胎肝cDNA文库得到干扰素诱导表达的分子IFP35(interferon-induced protein 35 kDa),进而通过免疫共沉淀和细胞内共定位技术确证了ΔPH和IFP35之间的相互作用.这些结果提示Jlip可能参与干扰素调控的生理过程.此外,在酵母双杂交实验中,我们还发现,Jlip可以与其自身相互作用,并且在免疫共沉淀实验中得到确证.通过蛋白交联实验揭示,Jlip可以形成二聚体和三聚体形式,其C末端的亮氨酸皎边可能介导了自身的多聚化,因此Jlip可能以多聚体的形式发挥生理功能.

目录

ABSTRACT

前 言

主要仪器设备和常用试剂的配制

英文缩写词

第一部分Jlip是caspase-6的底物

第一节Jlip可以被caspase-6切割-体外实验

第二节Jlip被caspase-6切割释放△PH片段

第二部分Jlip相互作用蛋白的筛选

第三部分Jlip与IFP35的相互作用研究

第一节IFP35在细胞内的定位

第二节Jlip及其缺失体与IFP35在正常培养条件下的共定位研究

第三节Jlip与IFP35在诱导凋亡条件下的共定位研究

第四节Jlip与IFP35的免疫共沉淀研究

第四部分Jlip可以自身作用并形成多聚体

第一节Jlip自身相互作用的验证

第二节Jlip可以形成二聚体和三聚体

总结与讨论

参考文献

利用一种新的网上工具Scansite进行蛋白质磷酸化预测

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