心肌细胞机械敏感性阴离子通道及信号转导机制的研究

摘要

机械刺激如同化学刺激一样能被体内的细胞所感受,它们在细胞的生长、发育、生存及维持内环境稳定及中均有重要作用.我们以白羽鸡胚心肌细胞为对象,胞外低渗液作为机械刺激,利用膜片钳技术、激光共聚焦显微镜和电镜等方法研究了低渗刺激激活的容积敏感性Cl<'->通道,对它的性质、可能的信号转导途径及膜形态变化等方面进行了较为全面的研究,并探讨了它所产生的生理意义.低渗刺激能诱发出鸡胚心肌细胞上一个外向整流,没有时间依赖性的容积敏感性Cl<'->电流I<,(Cl,swell),该电流是在等渗时基础Cl<'->电流上被270mOsm·L<'-1>低渗溶液激活,从其外在表现性质判断该电流是由Cl<'->通道大家族中ClC-3通道激活所致.该电流的产生受到酪氨酸磷酸化、PKC的激活和细胞骨架解聚和再聚合物动力学过程调控.细胞骨架的作用出现在PKC的下游.细胞膜形态的变化与该电流产生有关,但是产生的机制与大肠杆菌机械敏感性离子通道有所不同,其过程可能更为复杂.细胞内蛋白质的作用是相互影响的,容积敏感性Cl<'->通道也是如此,它的活性受到PTK、PKC、细胞骨架等因素综合调节.

目录

文摘

英文文摘

文献综述

第一部分：机械刺激的生理功能及细胞对机械刺激的感受

一，机械刺激的功能

二，机械刺激的研究方法

第二部分：机械刺激，机械敏感性离子通道与细胞体积调节

一，细胞体积调节的一般过程

二，影响细胞体积的因素

三，牵张敏感的阳离子通道

四，牵张敏感的阴离子通

五，几种可能的容积敏感性Cl-通道蛋白

六，几种与容积敏感性离子通道有关的信号分子

七，细胞机械敏感性反应的分子机制

第三部分：本研究的意义

第四部分：参考文献

材料和方法

一，试剂与药品

二，细胞培养

三，电流记录

四，给药方法

五，细胞骨架激光共聚焦显微镜观察

六，氯丙嗪作用后细胞表面电镜观察

结果

一，鸡胚心肌细胞培养

二，容积敏感性Cl-电流I(Cl,swell)的诱发

三，DIDS对I(Cl,swell)的作用

四，酪氨酸激酶抑制genistein对I(Cl,swell)的抑制作用

五，PKC激动剂PMA和抑制剂chelerythrine chloride对I(Cl,swell)的作用

六，细胞骨架在低渗诱发I(Cl,swell)中的作用

七，CB与PKC激动剂PMA对低渗诱发电流的共同作用。

八，氯丙嗪对I(Cl,swell)的作用

讨论

一，容积敏感性Cl-通道的激活

二，磷酸化作用与可能的低渗刺激感受分子

三，细胞骨架的作用

四，膜形态变化与低渗刺激感受

五，可能的信号途径

六，小结

七，今后进一步研究内容

八，参考文献

附录

致谢