间充质干细胞分离、扩增及定向成骨分化的蛋白质组学分析

摘要

目的：探讨用蛋白质组学方法分析人骨髓间充质干细胞(Msc)定向成骨细胞诱导分化中细胞蛋白表达谱的改变。 方法：从人骨髓细胞中分离获得MSC，经细胞表型及多向分化能力测定鉴定MSC的纯度和功能后，采用定向成骨细胞分化诱导培养体系，于分化后14天分别提取未分化细胞及分化后细胞的总蛋白，双向电泳分析，确定蛋白差异点，经酶切后行蛋白肽质量指纹谱(Peptide Mass Fingerprinting)鉴定差异蛋白表达。 结果：白骨髓中成功分离获得间充质干细胞，细胞形态均一，为典型的纺锤状，大约14d有超过80％的细胞融合。细胞表型分析为SH-3、4(CD73)、SH-2(CD105)、间质细胞标志CD166阳性，造血细胞表面标志CD34、CD45阴性，纯度在90％以上。细胞周期分析表明，只有3.2％的细胞处于活跃的增殖分裂期即S期，90％的细胞处于静息期即G<,0>-G<,1>期。细胞在特定诱导条件下可分化为多种问质细胞，如向脂肪分化，细胞内有脂滴的形成；向成骨分化，碱性磷酸酶表达增加，培养3w，可见骨结节形成；向成软骨分化，Collagen-Ⅱ表达阳性。RT-PCR检测特异性表达产物，进一步从分子水平证实所获得MSC的多向分化潜能。运用双向电泳实验技术，观察到MSC与成骨细胞凝胶图像存在多个蛋白差异点，挑出其中的38个蛋白差异点，经过胶内酶切，质谱分析，共鉴定出24个差异蛋白分子表达。 结论：用蛋白质组学方法可高通量筛选与Msc定向诱导成骨细胞分化相关的重要蛋白。

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文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

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引 言

第一部分 人骨髓间充质干细胞分离培养及其生物学特性

1材料

2方法

3结果

4 讨论

小结

第二部分 间充质干细胞定向成骨细胞分化的蛋白质组学分析

1材料

2方法

3结果

4 讨论

小结

参考文献

致 谢

硕士期间发表的署名文章