HER2靶向的嵌合性T细胞受体基因在淋巴造血细胞中的表达及其抗肿瘤效应的研究

摘要

目的和意义:该研究期望:1)应用CD3/CD28单抗激活淋巴细胞、CH296包被和离心转染等,建立一种能将p185HER2特异的chTCR基因通过逆转录病毒(RV)载体高效转染淋巴细胞的方法.2)研究转染chTCR的淋巴细胞能否特异性杀伤表达p185HER2的肿瘤细胞.3)比较ζ和γ信号传导肽在同一chTCR结构中发挥信号传导的作用.4)应用逆转录病毒载体将chTCR转染小鼠造血干细胞,用转基因造血干细胞移植的受体小鼠在造血重建后,其淋巴细胞是否对相应的肿瘤细胞具有排斥作用.方法和结果:将p185HER2特异性的mAb(N29)的scFv基因与ζ和γ信号传导肽基因分别构建入逆转录病毒载体的骨架pRET6得到逆转录病毒载体pRET6 N29γ和pRET6 N29ζ.乒乓转染法将载体转入包装细胞系PG13、GP+E86成为稳定、高效的产病毒细胞系,病毒滴度约为1×10<'6>CFU/ml.将HER2/neu基因构建入逆转录病毒载体的骨架pRET6得到逆转录病毒载体pRET6HER2,将载体转入包装细胞系GP+E86成为稳定、高效的产病毒细胞系,收集病毒上清分别转染小鼠肿瘤细胞系MCA-205和MT-901,转基因细胞系皮下及静脉注射后得到表达人p185HER2的小鼠皮下肿瘤和肺转移瘤模型.含pRET6 N29γ和pRET6 N29ζ病毒上清分别转染小鼠骨髓造血细胞后移植给经TBI 9.0 Gy预处理的同系小鼠,移植后6个月时分别经皮下或静脉接种转染HER2的同系小鼠肿瘤细胞系MCA-205/HER2和MT-901/HER2.

目录

英文缩写

第一部分表达嵌合性T细胞受体基因的逆转录病毒载体的构建

材料与方法

结 果

讨 论

参考文献

第二部分嵌合性T细胞受体基因在小鼠及人淋巴细胞中的表达及其抗肿瘤作用研究

材料与方法

结 果

讨 论

参考文献

第三部分转染嵌合性T细胞受体基因的造血干细胞在小鼠体内的抗肿瘤作用研究

材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

小 结

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