长链非编码RNA SRLR在肾癌索拉非尼耐药中的机制研究

摘要

目的：索拉非尼可以明显改善肾癌患者的总体预后，尤其是无瘤进展期的延长，但是仍有大约有20％的患者在早期用药时表现为无效甚至为肿瘤进展，这在很大程度上影响了索拉非尼的使用和临床效果。然而，关于肾癌索拉非尼耐药的具体机制目前尚不清楚。除此之外，肾癌索拉非尼治疗缺乏明确的标志物。近年来研究发现长链非编码RNA在很多生物学机制上发挥着重要作用，最近有研究提出它在肿瘤的药物耐药中发挥着重要作用，并有可能成为肿瘤药物治疗的分子标志物。然而，长链非编码RNA在肾癌索拉非尼耐药中的作用和机制缺乏相关的报道。因此，我们以此为契机，探索长链非编码RNA在肾癌索拉非尼耐药中的作用以及寻找耐药的相关分子标志物，为肾癌索拉非尼治疗提供理论基础。
　　方法：1）选取临床索拉非尼耐药和敏感的标本进行RNA芯片分析，并跟据差异倍数、P值，筛选出有意义的长链非编码RNA。2）扩大临床样本对筛选的长链非编码RNA进行验证。选取成熟的肾癌细胞系，根据索拉非尼敏感性，进行进一步验证，筛选出差异最明显的长链非编码RNA。3）对筛选的长链非编码RNA进行干扰或过表达，观察肾癌细胞系对索拉非尼敏感性的变化。4）将过表达长链非编码RNA的细胞系荷瘤到小鼠皮下，观察移植瘤对索拉非尼的敏感性变化。5）筛选长链非编码RNA下游的受体酪氨酸激酶通路，寻找下游靶点。加减法实验确定下游靶点在长链非编码RNA影响肾癌索拉非尼耐药中的作用。6）临床样本中验证长链非编码RNA与肾癌索拉非尼疗效的相关性。
　　结果：1）成功筛选出肾癌索拉非尼耐药相关的长链非编码RNA，命名为lncRNA-SRLR(sorafenib resistance associated lncRNA in renal cell carcinoma)。发现其在扩大的临床样本中以及相对耐药的肾癌细胞系中均高表达。2）下调lncRNA-SRLR可以增加索拉非尼对肾癌细胞系的杀伤作用，上调lncRNA-SRLR则可以使肾癌细胞系对索拉非尼的耐药性增加，同样在小鼠体内实验中证实了上调lncRNA-SRLR可以使移植瘤对索拉非尼反应性减弱。3）lncRNA-SRLR通过激活STAT3进而促进肾癌细胞系索拉非尼耐药。lncRNA-SRLR通过与NF-κB结合促进其与IL-6启动子区结合，促进IL-6转录进而激活STAT3。4）联合IL-6或STAT3抑制剂可以明显增加索拉非尼对肾癌细胞系的抑制作用。5）临床样本中发现，lncRNA-SRLR和IL-6在肾癌组织中的表达有一定的相关性，而且低表达lncRNA-SRLR或IL-6的患者对索拉非尼更敏感。
　　结论：lncRNA-SRLR通过影响NF-κB/IL-6/STAT3通路活性进而促进肾癌索拉非尼耐药。低表达lncRNA-SRLR的肾癌病人对索拉非尼有更好的反应性。因此，lncRNA-SRLR有可能作为肾癌索拉非尼治疗新的标志物或靶点。

目录

声明

摘要

缩略词表

一、前言

二、课题设计

三、实验材料

四、实验方法

五、实验结果

六、讨论

参考文献

小结

综述 长链非编码RNA在肾癌靶向耐药中的研究进展

在读期间发表论文和参加科研工作情况

致谢