富氢盐水对免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠造血的影响

摘要

目的：
　　研究富氢盐水联合环孢素对免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠造血功能的影响并探讨其机制，为治疗再障寻找新方法。
　　方法：
　　建立再生障碍性贫血模型小鼠:近交系BALB/c小鼠，经X射线全身照射(5.0 Gy)（吸收剂量率为1.21 Gy/min，放射时间为248 s）后，4h内经尾静脉输入DBA/2小鼠的淋巴细胞悬液0.2 ml/只。实验动物分组:正常组;对照组(AA组);H2组(腹腔注射富氢盐水10 ml/kg); CsA组(腹腔注射环孢素注射液5 mg/kg); CH组(腹腔注射环孢素注射液5 mg/kg+富氢盐水10 ml/kg)。造模后第14天至第28天按照正常组和对照组不给药;H2组腹腔注射富氢盐水10 ml/kg给药;CsA组腹腔注射环孢素注射液5 mg/kg给药;CH组腹腔注射环孢素注射液5 mg/kg联合腹腔注射富氢盐水10 ml/kg给药进行治疗。用血细胞计数仪于第0、7、14、21和28天给各组小鼠测量血细胞数。第28天取小鼠血浆测定SOD、MDA、IL-3、IL-6、TNF-α和TGF-β。小鼠股骨及脾脏置于4％的多聚甲醛中固定，石蜡切片HE染色，免疫组化检测小鼠脾脏IFN-γ蛋白表达。
　　结果：
　　1、H2组小鼠造模后活动迟钝，进食水较差，小鼠生存率在50％;而CsA组小鼠进食水可，小鼠生存率在60％; CH组活动基本正常，进食可，生存率维持在80％，小鼠体重增长趋势明显。小鼠的生长状况，精神、食欲，体重增加，生存率提高等观察指标表明富氢盐水联合环孢素要明显优于单纯用富氢盐水和环孢素治疗AA。
　　2、CH组小鼠外周血白细胞、血红蛋白和血小板计数增加明显高于H2组和CsA组(P＜0.05)，骨髓病理HE染色切片有核细胞数增加，造血功能改善。
　　3、CH组小鼠血浆SOD水平明显高于H2组和CsA组(P＜0.05);CH组小鼠血浆MDA水平明显低于H2组和CsA组（P＜0.05）。
　　4、ELISA方法测定小鼠血浆中IL-3、IL-6、TNF-α和TGF-β水平，CH组小鼠造血正性调控细胞因子IL-3水平明显高于H2组和CsA组(P＜0.05); CH组小鼠负性调控细胞炎症因子IL-6、TNF-α和TGF-β水平明显低于H2组和CsA组(P＜0.05)。
　　5、免疫组化脾脏IFN-γ蛋白表达，与AA组相比，CH组脾脏IFN-γ阳性细胞数降低，差异显著(P＜0.05)。
　　结论：
　　1、富氢盐水能促进免疫介导的再生障碍性贫血模型小鼠的造血功能恢复，与环孢素联合具有协同作用。
　　2、富氢盐水对造血功能恢复的作用机制可能通过促进正性造血因子IL-3生成，抑制负性调控细胞炎症因子IL-6、TNF-α和TGF-β水平，降低脾脏IFN-γ蛋白表达。
　　3、富氢盐水对造血功能恢复的作用机制为能减少SOD消耗，减少脂质过氧化产物MDA生成。

目录

摘要

符号说明

前言

1、再生障碍性贫血及其研究进展

2、氢气的生物学作用

材料与方法

1、实验动物

2、主要试剂

3、主要实验仪器

4、富氢盐水制备

5、动物模型的制备

6、动物模型成功与否的判断

7、实验动物分组及干预

8、石蜡切片制备

9、切片HE染色

10、免疫组化

11、SOD、MDA测定

12、ELISA方法测定IL-3、IL-6、TNF-α、TGF-β

13、统计分析

结果

1、小鼠的一般生长情况及生存率

2、小鼠的体重变化

3、小鼠外周血白细胞计数

4、小鼠外周血血红蛋白

5、小鼠外周血血小板计数

6、氧化因子

7、细胞因子

8、IFN-γ免疫组化

9、骨髓HE染色病理改变

10、吉姆萨染色血片

讨论

1、再生障碍性贫血免疫异常机制

2、免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠优化设计

3、富氢盐水对再生障碍性贫血的影响

4、环孢素对再障的作用

5、富氢盐水联合环孢素对再生障碍性贫血的影响

结论

附图

参考文献

综述 氢气对再生障碍性贫血治疗方面的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文

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