从苦皮藤内生菌中筛选农用抗生素的研究

摘要

植物内生菌是在植物体内度过全部或近乎全部生活周期而不使寄主表现任何症状的微生物，是一类相对较新的类群。已从一些植物中分离到了能代谢农用活性物质的内生菌。本研究的目的是分离苦皮藤内生真菌和内生放线菌，并对其代谢产物的农用活性进行筛选，然后对菌株活性成分进行分离和鉴定。主要结果如下： 1.采用组织块法和匀浆法，以马铃薯葡萄糖培养基、苦皮藤煎汁培养基为内生真菌分离用培养基，高氏一号培养基、牛肉膏蛋白胨培养基为内生放线菌分离用培养基，从苦皮藤根和茎的表皮、韧皮部和木质部中分离得到81株内生菌，其中内生真菌68株，内生放线菌13株。 2.从82株内生菌中，筛选到一株产生杀虫活性成分的菌株Hd3和5株产抗菌物质的菌株A10、2C2、a4、a5和c4。Hd3菌株菌丝体的乙酸乙酯提取物5﹪的丙酮溶液对3龄粘虫的胃毒致死率为100﹪。菌株A10、2C2、a4、a5和c4发酵产物对小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、苹果炭疽病菌、烟草赤星病菌、番茄早疫病菌和小麦纹枯病菌的菌丝生长有不同程度的抑菌活性。盆栽实验结果表明，5株菌株的代谢产物对小麦白粉病菌的保护作用均在65﹪以上，a4和c42菌株的发酵液原液对黄瓜霜霉病菌的保护作用达到60﹪。 3.在活性追踪指引下，采用TLC和HPLC技术，从Hd3菌株菌丝体的乙酸乙酯粗提物中分离到2个杀虫活性物质H4.5和H4.6。其中H4.5的结构为2,3-二甲氧基-5-甲基苯酚，为首次从微生物中分离得到的化合物，并首次发现该化合物具有杀虫活性，对3龄粘虫的LD50为3.78μg/头(胃毒)。根据真菌的分类及鉴定方法，对比相关分类系统，将Hd3菌株鉴定为曲霉属环绕亚属真菌。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明、导师承诺及关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

1.1植物内生菌及农抗活性物质产生菌的研究进展

1.1.1植物内生菌概述

1.1.2内生真菌及农抗活性物质

1.1.3内生放线菌及农抗活性物质

1.1.4内生细菌及农抗活性物质

1.2植物内生菌活性物质的产生机理

1.3苦皮藤内生菌研究概况

1.4论文设计思路

第二章苦皮藤内生菌的分离纯化

2.1材料和方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与分析

2.2.1表面消毒效果

2.2.2内生真菌的分离

2.2.3内生放线菌的分离结果

2.3讨论

2.3.1内生菌分离培养基的选用

2.3.2关于苦皮藤内生菌在植物组织中的分布

第三章产农用抗生素的苦皮藤内生菌筛选

3.1材料和方法

3.1.1材料

3.1.2方法

3.2结果与分析

3.2.1内生菌发酵产物的杀虫活性

3.2.2内生菌发酵产物的杀菌活性

3.2.3 A10、2C2、a4、a5和c4 5株内生菌发酵产物的杀菌活性

3.3小结

第四章Hd3菌株杀虫活性成分研究及菌株鉴定

4.1材料和方法

4.1.1材料

4.1.2方法

4.2结果与分析

4.2.1 Hd3菌株菌丝体提取物的杀虫活性

4.2.2 Hd3菌株代谢产物杀虫活性成分的分离

4.2.3化合物H4.5结构鉴定

4.2.4 H4.5的毒力测定

4.2.5 Hd3菌株鉴定

4.3讨论

4.3.1关于化合物H4.5(2,3-二甲氧基-5-甲基苯酚)

4.3.2植物内生菌次生代谢产物中的活性物质

第五章结论

参考文献

附图

致谢

作者简介