毛花猕猴桃PR2蛋白基因的克隆及其对猕猴桃溃疡病菌的响应

摘要

猕猴桃细菌性溃疡病是由丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种（Pseudomonas syringae pv.Actinidae,PSA）引起的毁灭性的细菌性病害，严重影响了猕猴桃的品质和产量，给世界猕猴桃产业带来了严重的经济损失。目前，猕猴桃溃疡病还是以化学防治为主，然而大量化学农药的使用又会影响猕猴桃产品的品质和安全。因此，培育抗病品种成为一种减轻猕猴桃溃疡病危害的有效手段。而与传统育种相比，转基因抗病育种可将特定的抗病基因转入猕猴桃，对其进行遗传改良，从而可大大缩短育种年限，加快抗病育种进程。本研究以毛花猕猴桃叶片为试验材料，从前期筛选到的可能具有抗溃疡病功能的 PR2蛋白基因入手，对其进行克隆，并对该基因进行了亚细胞定位及抗溃疡病功能鉴定，旨在为猕猴桃转基因抗病育种提供可靠的基因资源和分子依据。研究结果如下： （1）成功克隆了毛花猕猴桃中的 PR2 蛋白基因，该基因全长 732bp，含有732bp的完整开放阅读框，共编码243个氨基酸。 （2）构建了融合蛋白表达载体 35S:PR2-GFP，并通过冻融法成功将其转化至根癌农杆菌感受态细胞GV3101。 （3）成功将35S:GFP空载对照和35S:PR2-GFP融合蛋白表达载体瞬时转化到“本氏”烟草中，并对瞬转烟草叶片进行亚细胞定位分析及抗溃疡病功能鉴定。亚细胞定位结果表明 PR2 蛋白基因定位于细胞核及细胞质。抗溃疡病功能鉴定结果表明转入35S:GFP空载对照的烟草叶片接种PSA后出现过敏反应，而转入35S:PR2-GFP融合蛋白表达载体的则无症状或症状较轻，证实了该基因具有一定的抗溃疡病功能。

目录

声明

第一章 文献综述

1.1猕猴桃产业发展现状

1.2猕猴桃溃疡病菌研究进展

1.3猕猴桃溃疡病研究概况

1.4 植物病程相关基因研究

1.5本研究的目的及意义

第二章 毛花猕猴桃PR2蛋白基因的克隆及表达分析

2.1试验材料

2.2 试验方法

第三章结果与分析

3.1 猕猴桃总RNA的提取

3.2 PR2蛋白基因PCR扩增

3.3 PR2 /pMD19T重组质粒的鉴定

3.4猕猴桃PR2蛋白基因序列生物信息学分析

3.5 35S:PR2-GFP融合蛋白表达载体的构建

3.6 35S:PR2-GFP融合蛋白表达载体转化农杆菌

3.5 PR2蛋白基因亚细胞定位分析

3.6 PR2蛋白基因抗溃疡病功能分析

第四章讨论

4.1猕猴桃总RNA提取

4.2.猕猴桃PR2蛋白基因的筛选

4.3猕猴桃溃疡病菌菌液接种浓度及时间

第五章结论

参考文献

致谢

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