PRRSV具有跨膜特性的非结构蛋白参与病毒复制转录复合体形成机理的研究

摘要

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是严重危胁到全球养猪业的传染性疾病，其病原体是猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）。PRRSV编码的非结构蛋白nsp2、nsp3和nsp5是跨膜蛋白。为了探究这几个跨膜蛋白在病毒复制转录复合体（RTC）形成中的作用，本研究筛选并鉴定了与这三个跨膜蛋白存在相互作用的非结构蛋白。 首先采用酵母双杂交技术（Y2H），筛选出与nsp2、nsp3和nsp5有相互作用的蛋白，然后用双分子荧光互补（BiFC）技术验证了这些存在相互作用的蛋白，以去除假阳性结果。通过Y2H和BiFC，检测到nsp9、nsp12和跨膜蛋白nsp3、nsp5与多个非结构蛋白有相互作用，表明这些非结构蛋白可能充当RTC形成的核心组分。最后使用Pull-down技术进一步验证其中的部分蛋白间的相互作用。 包含预测的跨膜结构域的疏水性非结构蛋白nsp2、nsp3和nsp5被认为涉及膜修饰和双层膜囊泡（DMV）的形成，这是由动脉炎病毒感染诱导的典型结构。在PRRSV的3种跨膜的非结构蛋白之间，我们发现nsp2与nsp3、nsp5与nsp3存在相互作用，并且nsp3自身也可以相互作用，因此推测这三种PRRSV跨膜蛋白可能在病毒复制过程中形成膜结合的nsp2-nsp3（×n）-nsp5复合体，即以nsp3为中心，nsp2和nsp5为侧翼形成一个锚定在 DMV 膜上的一个支架，为复制转录复合体的形成起到招募非结构蛋白，并给以nsp9和nsp12为中心的RTC结构提供支撑，从而参与病毒的复制转录过程。

目录

第一章 文献综述

1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述

1.2 PRRSV的生物学研究进展

1.3 PRRSV跨膜蛋白的研究状况

1.4 蛋白互作的研究技术

1.5 研究的内容与意义

第二章 酵母双杂技术筛选与PRRSV跨膜nsp互作的蛋白

2.1 材料、试剂、溶液与主要设备

2.2 方法

2.3 结果与分析

2.4 讨论

第三章 双分子荧光互补技术验证跨膜蛋白与非结构蛋白的互作

3.1 材料与试剂

3.2 方法

3.3 结果与分析

3.4 讨论

第四章 Pull-Down验证跨膜蛋白与其它非结构蛋白的相互作用

4.1 材料与试剂

4.2 方法

4.3 结果与分析

4.4 讨论

第五章 讨论与结论

5.1讨论

5.2 结论

参考文献

附录

致谢

作者简介