氧化修饰与抗氧化剂在动脉粥样硬化形成中作用机制的实验研究

摘要

本研究根据氧化修饰在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)形成过程中的作用以及自由基反应链式和多态性的特点，按照自由基理论研究进展，采用自由剂清除剂—“安体欣”为治疗药物，建立AS家兔模型，给予动物喂饲在普通饲料加入10％蛋黄粉、1％胆固醇、5％猪油组成的高脂饲料(HL)，并加入不同剂量氧化剂(过氧化氢hydrogenperoxide，HP)建立AS动物模型，探讨氧化损伤以及复合抗氧化剂(AO)对动物模型的影响机制。实验分组如下： A、为阴性对照组(CON)，自由摄食普通饲料；B、为HL+AO组，喂饲高脂饲料，同时灌胃AO(0.06g·kg-1)；C、为HL组，单纯喂饲饲高脂饲料；D、为HL+低剂量氧化剂组，喂饲含有HP(0.73ml·kg-1)的高脂饲料；E、为HL+中剂量氧化剂组，喂饲含有HP(1.47ml·kg-1)的高脂饲料；F、为HL+高剂量氧化剂组，喂饲含有HP(2.93ml·kg-1)的高脂饲料；G、为HL+中剂量HP+AO组，喂饲含有HP(1.47ml·kg-1)的高脂饲料，同时灌胃AO(0.06g·kg-1)。 实验家兔分笼喂养，自由摄食、饮水，共喂养12周。喂养第12周末乙醚吸入麻醉，自腹腔静脉分别采抗凝血和非抗凝血。抗凝血用于检测血常规和血液流变学，非抗凝血用于分离血清，-20℃冻存以备检测各组血清中脂质、MDA、GSH/GSSH、总蛋白等含量。处死动物，迅速取部分肝、心、主动脉浸入10％甲醛固定，以制备组织切片进行形态学观察，并检测P53、bcl-2等相关蛋白表达。另取肝、心、主动脉等组织，按照1：5比例用0.9％生理盐水研磨制成相应的组织匀浆，-20℃冻存用以检测MDA、总抗氧化力、总蛋白等自由基相关指标。 研究结果表明：与对照组相比，模型组血液WBC、RBC、PLT、HCT、血脂显著增加(P＜0.05)。与模型组相比，不同剂量氧化剂组的血脂水平、WBC、HCT显著升高(P＜0.05)，血液中TC、LDL等血脂指标、HCT、血浆粘度、纤维蛋白原等血流变指标以及血清和肝匀浆GSH、GSSH、GSSH/GSH等氧化损伤指标值随着氧化剂剂量的增加而增加。MCV、MCH、MCHC、全血低切粘度、血清总蛋白、肝匀浆总抗氧化力等指标与氧化剂剂量呈负相关。作为影响血流变指标的主要因素，HCT升高反映出氧化剂进一步增加血液粘度，而高血粘是引发AS的重要危险因素，同时也是AS的重要表现。抗氧化剂组的白细胞数(WBC)、红细胞数(RBC)、血小板数(PLT)较模型组都有显著性意义(P＜0.05)，给予抗氧化剂后，可以改善血脂水平，减低自由基损伤检测指标。氧化损伤促进p53、bcl-2等相关蛋白的表达，抗氧化剂可有效抑制此类蛋白的表达。 研究结论：家兔AS模型制备是成功的；氧化修饰诱发的自由基损伤是AS形成的重要机理之一，表现为血流变指标改变、血脂水平显著升高、动脉粥样硬化指数(AL)升高、血清和肝脏匀浆MDA升高、肝脏匀浆总抗氧化力降低、HDL/LDL值显著性下降等；复合抗氧化剂在一定程度上拮抗AS的形成，主要表现为血流变指标改善、血脂和自由基损伤的相关指标降低，并对体内抗氧化水平具有一定调节和增强作用。

目录

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缩略词表

前 言

第一部分文献回顾 氧化修饰与抗氧化剂在动脉粥样硬化形成中的作用机制研究进展

一、动脉粥样硬化概述

二、动脉粥样硬化形成中的细胞学基础

三、动脉粥样硬化形成中细胞因子的作用

四、血液流变学与动脉粥样硬化

五、氧化修饰导致动脉粥样硬化的学说与证据

六、动脉粥样硬化氧化修饰的分子机理

七、抗氧化与动脉粥样硬化的防治研究

八、问题与展望

第二部分材料与方法

第三部分结 果

第四部分讨 论

小 结

附 图

致 谢

参考文献