抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体在拟南芥中的表达及其免疫学特性的初步研究

摘要

汉滩病毒（HTNV）主要引起肾综合征出血热（HFRS），迄今尚无特异、有效的治疗药物。抗HTNV鼠源性单克隆抗体（mAb），虽然有较好的抗病毒作用，但应用于人体可能产生抗鼠抗体。而人源性mAb制备困难、产量低，目前也难以应用。基因工程抗体在原核系统中表达虽然产量较高，但由于其受加工修饰功能的限制，会影响表达产物的生物学特性；而真核表达又存在表达量低的难题。运用合适的植物表达系统表达抗体不仅表达产量高，而且由于植物表达系统有良好的加工修饰功能，其表达产物能保持良好的生物学特性。
　　本研究用基因工程技术构建了鼠/人嵌合抗体基因，并将其导入拟南芥内，尝试在植物体内表达，主要方法和结果如下：
　　1．将抗HTNV鼠源性mAb3G1的可变区基因及人抗体恒定区基因进行拼接，构建了植物嵌合表达载体3G1MH-pCAMBIA2301，转化入根瘤农杆菌中，利用根瘤农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥，获得转基因植株。提取T0代转基因植株基因组DNA，应用针对轻、重链序列的特异性引物进行PCR检测，筛选出整合有目的基因的阳性植株。以轻、重链探针对RNA进行NorthernBlot检测，检测出完整的轻、重链RNA，证明转基因植株构建成功。
　　2.针对抗体轻、重链核苷酸序列设计特异性引物，对转基因植物的cDNA进行实时荧光定量PCR检测，结果显示不同转基因植株间的RNA转录量存在差异，挑选出轻、重链转录量较高的5株表达株系，通过以抗人Kappa链及抗人Fc段抗体分别做WesternBlot检测，结果显示有目的蛋白的表达，但表达的蛋白分子量小于预期大小，实验提示抗体的Fc段可能存在一定程度的降解。
　　3.以HTNV感染细胞为抗原，植物蛋白提取物为待测抗体，羊抗人Kappa链抗体为一抗，FITC标记的兔抗羊抗体为二抗做间接免疫荧光检测，结果证明目的蛋白具有与HTNV抗原的结合活性。
　　本研究对基因工程抗体在植物体系中的表达进行了有益的探索，提供了有用的理论和实验依据。

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文献回顾

1 汉坦病毒结构蛋白免疫学特性分析

2 HTNV 抗体研究的现状

3 植物抗体的研究现状

4 农杆菌在转基因植物研究中的应用

正文

实验一 抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因植物载体的构建

实验二 抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体在拟南芥中的表达、鉴定及其免疫学特性初步研究

小 结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢