马铃薯镰孢菌病害病原菌的分离与鉴定及其药剂敏感性研究

摘要

马铃薯镰孢菌病害是近年来影响马铃薯生产的一类重要的病害，其主要在生长期表现为马铃薯枯萎病，储藏期表现为马铃薯干腐病。病害造成的经济损失，一般年份能达到20％-50%，严重的年份可达70%。针对日渐严重的马铃薯镰孢菌病害，本研究从内蒙古和山东省采集了马铃薯田间枯萎病株及干腐病病薯，通过组织分离法获得了相应的病原菌，结合形态学特性和分子生物学方法，初步明确了当前影响马铃薯生产的镰孢菌病害种类、优势种及其主要生物学性状，取得的以下结果：
　　1.从疑似马铃薯枯萎病株及干腐病薯块，用组织分离法获得了152个纯化的镰孢菌菌株，其中从田间枯萎病株上分离到62个菌株，从块茎上分离到90个菌株。通过单孢挑取法获得各菌株的单孢菌落，应用CTAB法提取了各单孢菌株的总DNA，PCR扩增获得了各自的ITS和β-tubulin目的片段，经测序和BLAST分析，分别构建了获得菌株与BLAST相关菌株的ITS序列和β-tubulin序列的系统进化树；综合形态学、生物学特性和分子生物学方法分析，这些菌株主要包括尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum），接骨木镰刀菌（F. sambucinum），茄病镰刀菌（F. solani），锐顶镰刀菌（F. acuminatum），三线镰刀菌（F. tricinctum），木贼镰刀菌（F. equiseti）和层生镰刀菌（F. proliferatum)等7种镰刀菌，其中从田间枯萎病株上分离到镰孢菌种类有：尖孢镰刀菌（50株，占80.64%），接骨木镰刀菌（2株，占3.22%），层生镰刀菌（5株，占8.06%），木贼镰刀菌（1株，占1.61%），茄病镰刀菌（2株，占3.22%）和三线镰刀菌（2株，占3.22%）等6个镰刀菌株系；从干腐病薯上分离的镰孢菌有：尖孢镰刀菌（21株，占23.33%），接骨木镰刀菌（36株，占40.00%），层生镰刀菌（8株，占8.89%），木贼镰刀菌（13株，占14.44%），茄病镰刀菌（2株，占2.22%），三线镰刀菌（4株，占4.44%）和锐顶镰刀菌（6株，占6.67%）等7个镰孢菌株系。综合田间植株和块茎上所分离的病原菌，得到最多的镰孢菌是尖孢镰刀菌分离71株，占总分离到病原菌的46.71%，得到接骨木镰刀菌分离38株，占总分离到病原的25%。初步明确了枯萎病植株和干腐病薯上镰孢菌的种类、占比以及这些镰孢菌之间的亲缘关系。
　　2.选择马铃薯克新1号，夏波蒂，大西洋，冀张薯8号，青薯9号，费乌瑞它，鲁引1号7个品种进行了马铃薯对所分离病原菌的抗性测定。所试品种块茎在30天时接种接骨木镰刀菌表皮病斑非常明显；接种60天时切开马铃薯块茎，发现接种接骨木镰刀菌的马铃薯全部感病，而接种其他6种镰孢菌的马铃薯，只是部分块茎表现出现维管束变黑现象。
　　3.选取生产实践常用的4种杀菌剂进行测室内抑菌的药效实验，采用室内菌丝生长速率法，发现四种药剂对尖孢镰刀菌和接骨木镰刀菌的抑菌浓度间都存在显著差异（P＜0.05）；回归分析结果表明：百菌清对尖孢镰刀菌的抑制效果最明显，EC50值为23.222μg/ml；噁霉灵效果最弱，EC50值为273.704μg/ml。接骨木镰刀菌对多菌灵最敏感， EC50为44.724μg/ml，噁霉灵对接骨木镰刀菌的抑制效果最弱，EC50值为211.567μg/ml。
　　本研究针对马铃薯镰孢菌病害开展了相关研究，明确了当前为害马铃薯镰孢菌种类及优势种、生物学特性及其亲缘关系，评价了当前生产常用马铃薯品种块茎对镰刀菌的抗病性效果，测定了接骨木镰刀菌和尖孢镰刀菌对生产常用的农药制剂的敏感度，对马铃薯镰孢菌病害的综合防控具有重要的意义。

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第一章 绪论

1.1马铃薯生产现状

1.2马铃薯镰孢菌病害的研究现状

1.2.1引起马铃薯干腐病以及枯萎病的病原

1.2.2马铃薯镰孢菌病害的发病条件

1.2.3镰孢菌形态分类研究概况

1.2.4马铃薯镰孢菌分子鉴定

1.3研究目的及意义

第二章 马铃薯镰孢菌病害病原的分离与鉴定

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与分析

2.2.1病原菌的形态学鉴定结果

2.2.2分子生物学鉴定

2.3结论与讨论

2.3.1 本章小结

2.3.2 讨论

第三章 马铃薯品种的抗镰孢菌测定

3.1 材料及方法

3.1.1 材料

3.1.2方法

3.2结果与分析

3.3结论与讨论

3.3.1 本章小结

3.3.2 讨论

第四章 病原菌的药剂敏感性测定

4.1材料与方法

4.1.1. 供试材料

4.1.2. 方法

4.2结果与分析

4.3结论与讨论

4.3.1 本章小结

4.3.2 讨论

第五章 结论

参考文献

附录Ⅰ获得菌株的采集地及BLAST结果

致谢